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申请/专利权人：株式会社图尔金

摘要：本发明涉及人工修饰的CRISPRCas9系统。更具体而言，本发明涉及具有改善的靶特异性的人工修饰的CRISPR酶以及包含所述酶的人工修饰的CRISPRCas9系统在基因组和或表观基因组修饰或工程化、基因组靶向、基因组编辑以及体外诊断中的用途。

主权项：1.一种人工工程化酿脓链球菌StreptococcuspyogenesCas9SpCas9变体，所述SpCas9变体包含：由SEQIDNO：30的突变序列组成的氨基酸序列，SEQIDNO：30具有SEQIDNO：17中的F539S、M763I和K890N的置换；其中，所述突变序列由选自于由以下突变所组成的组中的突变组成：iSEQIDNO：30中第112位、第492位、第671位和第735位的位点处的突变，其中，所述突变为第112位的赖氨酸K112被天冬酰胺置换，第492位的异亮氨酸I492被苯丙氨酸置换，第671位的精氨酸R671被组氨酸置换，以及第735位的赖氨酸K735被苏氨酸置换；iiSEQIDNO：30中第350位、第1007位和第1021位的位点处的突变，其中，所述突变为第350位的异亮氨酸I350被缬氨酸置换，第1007位的谷氨酸E1007被缬氨酸置换，以及第1021位的甲硫氨酸M1021被半胱氨酸置换；iiiSEQIDNO：30中第1277位的位点处的突变，其中，所述突变为第1227位的丝氨酸S1227被甘氨酸置换；ivSEQIDNO：30中第1007位和第1192位的位点处的突变，其中，所述突变为第1007位的谷氨酸E1007被甘氨酸置换，以及第1192位的赖氨酸K1192被精氨酸置换；vSEQIDNO：30中第889位的位点处的突变，其中，所述突变为第889位的丙氨酸A889被缬氨酸置换；viSEQIDNO：30中第1191位的位点处的突变，其中，所述突变为第1191位的赖氨酸K1191被谷氨酸置换；以及viiSEQIDNO：30中第1007位的位点处的突变，其中，所述突变为第1007位的谷氨酸E1007被选自于丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸中的一种氨基酸置换，其中，与野生型SpCas9相比，所述人工工程化SpCas9变体在中靶靶标位点处的插入缺失比增加；或在脱靶靶标位点处的插入缺失比降低。

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权利要求：

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