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摘要：本发明涉及建立一种核酸检测的方法，将传统环介导等温扩增（LAMP）进行引物改造，完成一次信号放大，之后通过链置换反应产生单链DNA靶标完成二次信号放大，实现无前间隔序列邻近基序（protospaceradjacentmotif）位点即无PAM位点限制的广适性CRISPR‑Cas12f核酸检测。本发明的意义在于利用环介导等温扩增技术的高灵敏性、操作便捷快速以及引物可按需改造的特点，结合链置换反应高效率，使得靶标信号二次级联放大，通过Cas12f酶识别单链核酸无PAM位点限制特点以及高特异性，提高了本方法的广适性、特异性、灵敏性，建议的恒温反应流程满足了及时快速的诊断需求，在核酸诊断领域具有重要的应用潜力与经济价值。
主权项：1.一种信号二次放大的无PAM点限制的CRISPR-Cas12f核酸检测平台，其特征在于：所述方法包括如下步骤：步骤一：以微生物核酸为模板，设计特异性引物并改造后进行等温扩增产生大量的目的片段，并插入了内切酶与切刻酶酶切位点；步骤二：将含有对应内切酶与切刻酶体系的液滴通过离心加入步骤一所得扩增产物中，恒温进行链置换反应，产生单链DNA；步骤三：将步骤二中所得扩增产物加入Cas12f检测体系，在特异性sgRNA介导下进行切割反应，可通过酶标仪读取实时荧光信号。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 海南大学 一种基于核酸信号二次放大的无PAM点限制的CRISPR-Cas12f核酸检测平台
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