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申请/专利权人:中国科学院大连化学物理研究所
摘要:本发明公开了一种微流控芯片及其在构建三维仿生神经血管单元模型中的应用。本发明提供的芯片包括上层芯片和下层芯片两层,上层芯片设有通孔a、通孔b、通孔c、通孔d和通孔状的开放式培养区;下层芯片设有基质室,基质室设置于开放式培养区下方,基质室与开放式培养区之间设有多孔薄膜,基质室两侧各设有一个培养室,基质室侧面设有基质入口a和基质入口b。本发明利用微流控技术,以具有良好生物相容性,透光性的PDMS为芯片材料,设计的可直接记录和观察神经血管单元细胞形态和功能的芯片。功能完备,操作简单,并且在芯片上可以独立完成各项信号检测,如细胞蛋白表达,细胞因子分泌,细胞增殖,凋亡检测等。
主权项:1.一种微流控芯片在构建三维仿生神经血管单元模型中的应用,其特征在于,所述微流控芯片包括上层芯片1和下层芯片10两层,所述上层芯片1设有通孔a2、通孔b3、通孔c4、通孔d6和通孔状的开放式培养区5;所述下层芯片10设有基质室8,所述基质室8设置于开放式培养区5下方,所述基质室8与开放式培养区5之间设有多孔薄膜7,所述基质室8两侧各设有一个培养室9,所述基质室8另外两侧均分别设有基质入口a81和基质入口b82,所述基质入口a81的位置与通孔a2的位置在竖直方向上相对应设置,所述基质入口b82的位置与通孔b3的位置在竖直方向上相对应设置;所述培养室9为条状,所述培养室9两端分别设有培养室入口91和培养室出口92,所述培养室入口91位置与通孔c4的位置在竖直方向上相对应设置,所述培养室出口92位置与通孔d6的位置在竖直方向上相对应设置;所述基质室8设有一条条状通道a83,所述通道a83两侧各设置一条与通道a83平行的条状通道b84,所述通道b84与所述培养室9平行,所述通道b84上设有数个与通道b84垂直的通道c85,所述通道c85使所述通道a83、所述通道b84、所述培养室9三者连通,数个所述通道c85与所述通道b84组合形成栅栏结构;所述通道a83两端各设有一个基质入口a81,所述通道b84两端各设有一个基质入口b82;所述三维仿生神经血管单元模型的应用方法,包括如下步骤:1芯片基质灌注采用matrigel工作液,将星形胶质细胞和神经元细胞悬液与工作液混合,加入基质入口a81、基质入口b82;加PBS缓冲液于培养皿中,将固定芯片的培养皿放入培养箱中孵育凝胶;2脑微血管内皮细胞和小胶质细胞接种及培养脑微血管内皮细胞制成悬液,取脑微血管内皮细胞悬液加入开放式培养区5内;小胶质细胞制成悬液,取小胶质细胞悬液分别加入到两个培养室入口91;将芯片放平移入培养箱中培养;3芯片神经血管单元功能监测采用血管内皮细胞钙粘蛋白VE-cadherin和Claudin-5检测芯片神经血管单元的完整性,采用血管内皮细胞黏附分子Claudin-5和星形胶质细胞GFAP检测芯片神经血管单元中两种细胞的位置关系,采用FITC标记的右旋糖苷监测芯片神经血管单元血脑屏障的通透性。
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