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申请/专利权人：格物致和生物科技(北京)有限公司;成都中医药大学

摘要：本公开涉及构建测序文库的方法、由该方法构建的测序文库、核苷酸组合以及试剂盒。本公开的建库方法可以将数个、数十个、数百个甚至上千个样本进行混合后完成后续的文库构建，减少了实验试剂的使用，节省了建库成本，提高了建库效率，非常适合大规模药物筛选及评价。本公开的核苷酸组合和包含其的试剂盒可用于二代测序文库的构建，可实现对上千细胞样本原代细胞、培养细胞或类器官细胞中的基因表达量的快捷、准确、高效、低成本检测。

主权项：1.一种构建测序文库的方法，包括以下步骤：1提供含mRNA的样本溶液；2通过磁珠富集样本溶液中的mRNA；3加入至少一种探针组合、至少一种标签序列和连接序列，所述至少一种探针组合中的每一种探针组合包括第一探针序列和第二探针序列；4退火，使第一探针序列和第二探针序列与mRNA杂交，并使第二探针序列和标签序列与连接序列杂交；5加入核酸连接酶，使杂交到mRNA的第一探针序列与第二探针序列连接，并使杂交到连接序列的第二探针序列与标签序列连接，以形成由第一探针序列、第二探针序列、连接序列和标签序列组成的连接产物；6加入洗脱缓冲液，使连接产物与mRNA分离并收集连接产物；7将连接产物通过DNA聚合酶互补为DNA双链；8以DNA双链为模板进行PCR扩增，构建测序文库；其中，所述第一探针序列、所述第二探针序列、所述标签序列和所述连接序列为组1或组2：1：所述第一探针序列包括3’端通用接头序列、可选的UMI分子序列和5’端特异互补序列，所述第二探针序列包括3’端特异互补序列、可选的UMI分子序列和5’端通用接头序列，所述标签序列包括3’端通用接头序列、index序列和5’端通用接头序列，所述连接序列的5’端序列与第二探针序列的5’端通用接头序列互补配对，所述连接序列的3’端序列与标签序列的3’端通用接头序列互补配对；2：所述第一探针序列包括5’端通用接头序列、可选的UMI分子序列和3’端特异互补序列，所述第二探针序列包括5’端特异互补序列、可选的UMI分子序列和3’端通用接头序列，所述标签序列包括5’端通用接头序列、index序列和3’端通用接头序列，所述连接序列的3’端序列与第二探针序列的3’端通用接头序列互补配对，所述连接序列的5’端序列与标签序列的5’端通用接头序列互补配对。

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