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申请/专利权人：北京全谱医学检验实验室有限公司
摘要：本发明属于分子生物学领域，涉及一种基于半连接PCR技术的二代测序文库构建方法及其应用。本发明实现方式有两种：1通过去除打断双链DNA5’‑磷酸基团，阻断打断后DNA双链两5’端与接头连接；而接头的另一条链含有5’‑磷酸基团，能够与打断后DNA双链两3’端连接，从而实现半连接。2通过在连接接头的3’端进行分子修饰，此分子修饰可以阻断接头平末端3’端与打断后DNA的5’端连接。本发明在将双链DNA打断后，通过半连接的方式针对含有UBC序列的DNA区域进行扩增，同时引入测序接头，集合了三种方法的优势，还有效避免了不含UBC序列的形成测序文库，非特异扩增，片断分布不集中等缺点。
主权项：1.一种基于半连接PCR技术的二代测序文库构建方法，包括通过半连接实现仅在双链DNA3’端连接接头，继而使用带有测序接头的特异引物扩增以构建文库，其中所述双链DNA为粘末端DNA片段，并且在所述双链DNA3’端连接的所述接头为3’端为平末端、5’端为进行了磷酸化的粘性末端的人工双链DNA片段；所述半连接通过如下方式实现：使用磷酸酶去除所述双链DNA末端的磷酸基团，以阻碍DNA连接酶催化的所述接头3’端与双链DNA5’端的连接；或对接头3’端进行分子修饰，以阻碍DNA连接酶催化的所述接头3’端与双链DNA5’端的连接。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京全谱医学检验实验室有限公司 基于半连接PCR技术的二代测序文库构建方法及试剂盒
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