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申请/专利权人：龟甲万株式会社

摘要：本发明的目的在于提供一种至少两种可用于标记循环法的选择标记基因发生缺失的转化曲霉属微生物、以及用于该转化曲霉属微生物的使用的组合物。上述目的是通过染色体上的至少两种可用于标记循环法的选择标记基因发生缺失的转化曲霉属Aspergillus微生物、以及包含至少两种在同源重组区域之间包括环出区域和可用于标记循环法的选择标记基因的核酸片段的曲霉属微生物转化用组合物而实现，其中所述选择标记基因包括色氨酸生物合成基因和与色氨酸生物合成基因不同的基因。

主权项：1.一种包括下述步骤（A）~步骤（B）的、利用可用于标记循环法的第一选择标记基因和可用于标记循环法的第二选择标记基因的、转化曲霉属微生物的染色体上的两种靶基因的缺失方法，该第一选择标记基因和该第二选择标记基因中的一个是trpC基因，另一个是pyrG基因，与trpC基因相对应的营养性物质是色氨酸，色氨酸的类似物是5-FAA，与pyrG基因相对应的营养性物质是尿嘧啶和或尿苷，尿嘧啶和或尿苷的类似物是5-FOA，以及，宿主生物为酱油曲霉（Aspergillussojae）、米曲霉（Aspergillusoryzae）、溜曲霉（Aspergillustamarii）、琉球曲霉（Aspergillusluchuensis）、宇佐美曲霉（Aspergillusususamii）、斋藤曲霉（Aspergillussaitoi）或构巢曲霉（Aspergillusnidulans）：（A）用在针对第一靶基因的同源重组区域中包括环出区域和第一选择标记基因的第一核酸片段及在针对第二靶基因的同源重组区域中包括环出区域和第二选择标记基因的第二核酸片段，将该第一靶基因和该第二靶基因作为靶，将染色体上的第一选择标记基因和第二选择标记基因发生全缺失的转化曲霉属微生物进行同源重组，由此获得转化曲霉属微生物的步骤；以及（B）在与所述第一选择标记基因相对应的营养性物质和与所述第二选择标记基因相对应的营养性物质不存在的条件下，将在所述步骤（A）中所获得的转化曲霉属微生物进行培养，由此对染色体上插入有所述第一选择标记基因和所述第二选择标记基因的转化曲霉属微生物进行筛选的步骤。

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权利要求：

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