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申请/专利权人：厦门大学

摘要：本发明涉及一种感知真菌信息素的重组酿酒酵母菌的构建方法及生物传感器，该重组酿酒酵母菌株敲除了丝氨酸苏氨酸细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂Far1、半乳糖诱导系统的负调节因子Gal80、内源GPCR受体Ste2，并将半乳糖诱导系统转录激活因子Gal4的启动子替换为酵母信息素响应基因Prm2的启动子；再采用持续性TEF2启动子驱动异源表达病原体真菌信息素GPCR受体和半乳糖启动子GAL1驱动的绿色荧光蛋白eGFP，该重组菌株可在感知低浓度信息素后产生强烈的绿色荧光蛋白信号，具有低渗漏、较高的信噪比等特点，可作为检测病原体真菌的生物传感器。

主权项：1.一种感知真菌信息素的重组酿酒酵母菌的构建方法，其特征在于，包括：PCR扩增获取基因编辑技术的gRNA表达片段：gFar1CDS、gGal80CDS、gGal4pr和gSte2CDS，将gRNA表达片段分别与表达载体p426-SNR52-GGA连接，得到重组质粒p426-gFar1CDS、重组质粒p426-gGal80CDS、重组质粒p426-gGal4pr和重组质粒p426-gSte2CDS；将所述重组质粒p426-gFar1CDS、所述重组质粒p426-gGal80CDS和所述重组质粒p426-gGal4pr与其对应的基因编辑整合片段电转化入酿酒酵母感受态细胞，得到重组菌株；向所述重组菌株中导入重组质粒p425Gal1-eGFP、真菌信息素受体的重组质粒和重组质粒p426-gSte2CDS，以便获得感知真菌信息素的重组酿酒酵母菌；所述重组质粒p426-gFar1CDS是以p426-SNR52-gRNA载体为模板，以核苷酸序列如SEQIDNO:2所示的R_Sup4和核苷酸序列如SEQIDNO:4所示的F_Sp.gFar1CDS为上下游引物，经PCR扩增得到gFar1条带，将目的条带经过DNA纯化试剂盒回收，得到胶回收产物；将胶回收产物与表达载体p426-SNR52-GGA连接；所述重组质粒p426-gSte2CDS是以p426-SNR52-gRNA载体为模板，以核苷酸序列如SEQIDNO:2所示的R_Sup4和核苷酸序列如SEQIDNO:7所示的F_Sp.gSte2CDS为引物，经PCR扩增得到gSte2CDS条带，将目的条带经过DNA纯化试剂盒回收，得到胶回收产物；将胶回收产物与表达载体p426-SNR52-GGA连接；所述重组质粒p425Gal1-eGFP是以载体pK127为模板，以核苷酸序列如SEQIDNO:20所示的eGFP_F和核苷酸序列如SEQIDNO:21所示的eGFP_R为上下游引物，经PCR扩增得到eGFP基因，将eGFP基因片段用BamHI和XhoI酶切，随后连接进入经过BamHI和XhoI双酶切的表达载体p425Gal1-eGFP；所述真菌信息素受体为白色念珠菌α因子信息素受体CaSte2。

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