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申请/专利权人：中科肽谷(山东)生命科学研究有限公司;山东省循证医学研究院有限公司烟台实验基地
摘要：本发明公开了一种利用海洋低温蛋白酶规模提取小分子PDRN的方法，属于生物技术领域。本发明利用研发制备的海洋新型单环刺螠低温蛋白酶与枯草杆菌蛋白酶和胰蛋白酶结合来提取鲑鱼精巢中的小分子PDRN，反应温度更低，酶解时间更短，所提取的小分子PDRN中分子量为50‑1000bp的DNA片段占总质量的90‑99%，提取率达到90%；采用该方法制备的PDRN分子量控制在10KD以内，且收率提升4‑5倍，纯度更佳。
主权项：1.一种利用海洋低温蛋白酶规模提取小分子PDRN的方法，其特征在于：用于提取该小分子PDRN的原料为鲑鱼精巢，具体包括以下步骤：（1）鲑鱼精巢进行精洗，加入8倍体积的预处理液进行匀浆；（2）在步骤（1）所得匀浆液中加入4%的复合酶解液，27℃酶解6h；（3）在步骤（2）所得的酶解液中加入1%的表面活性剂，0.5%的螯合剂，600rpm混合2h，过滤得上清液；（4）在步骤（3）所得的上清液中加入DNA裂解液，55℃裂解30min得到裂解液；（5）在步骤（4）所得的裂解液中加入3倍体积4℃预冷的沉淀液，-20℃静置3h，过滤弃上清，收集沉淀；（6）将步骤（5）收集的沉淀冷冻干燥，得到小分子PDRN片段。
全文数据：
权利要求：
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