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申请/专利权人：西湖大学
摘要：本发明公开了一种基于过滤原理的胶内蛋白酶解前处理方法，属于生物技术领域。前处理方法具体过程如下：1样品蛋白通过凝胶电泳分离并染色脱色后，切下目标条带得到胶粒；2将胶粒放置在过滤装置中，在过滤装置下方设置抽吸设备或者上方设置正压送气设备；3胶粒在过滤装置中脱色后进行还原烷基化反应，随后进行酶解反应得到肽段溶液，利用抽吸设备或正压送气设备将肽段溶液转移至其它容器中，用于后续研究。本发明提供的前处理方法，得到的蛋白鉴定结果从蛋白覆盖率、蛋白鉴定数目、肽段鉴定数目及谱图鉴定数目和用传统EP管前处理的结果是可以比拟的，并大幅度节省了人工实验操作时间，为蛋白胶前处理实验自动化的实现奠定了基础。
主权项：1.一种基于过滤原理的胶内蛋白酶解前处理方法，其特征在于，具体步骤如下：S1：将样品蛋白通过凝胶电泳分离并对蛋白胶染色脱色后，切下目标条带并切成胶粒；S2：将步骤S1得到的胶粒转移至含有滤膜或筛板的过滤装置中，在过滤装置下方设置抽吸设备或者上方设置正压送气设备；所述过滤装置中的滤膜或筛板孔径小于胶粒的尺寸；用水冲洗胶粒后，利用抽吸设备或者正压送气设备排干水分，保持胶粒位于过滤装置的滤膜或筛板上；S3：向步骤S2中的过滤装置中加入脱色液，进行震荡脱色，脱除样品蛋白上的染色液；每次震荡脱色后，利用抽吸设备或正压送气设备排干脱色液，直至胶粒脱色完全；S4：向步骤S3中的过滤装置中加入有机溶剂润洗胶粒，胶粒完全脱水干燥后，利用抽吸设备或正压送气设备排干有机溶剂；S5：向步骤S4中的过滤装置中加入没过胶粒的蛋白酶溶液，进行酶解反应，得到肽段溶液；利用抽吸设备或正压送气设备将肽段溶液转移至其它容器中，用于后续研究。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 西湖大学 一种基于过滤原理的胶内蛋白酶解前处理方法
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