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申请/专利权人：河南大学
摘要：本发明属于基因工程技术领域，涉及病虫害防治，特别是指一种构建飞蝗雄虫体色Marker基因YellowProtein纯合突变体的方法及其应用。本发明以飞蝗YP基因的序列鉴定和功能研究为目的，利用飞蝗基因组序列和RACE技术，克隆了飞蝗YP基因全长序列，表达谱鉴定了YP基因在成虫头部、表皮、背板特异性高表达，对飞蝗YP基因进行了敲除，通过筛选构建了飞蝗YP纯合突变体。当突变体羽化至成虫后，发现雄虫相较于野生型体色没有出现变黄的现象，生测发现雄虫在求偶交配行为方面表现在求偶欲望下降，拒绝交配等表型。进一步确认了YP纯合体中YP基因功能缺失。YP纯合体的构建为其他飞蝗的研究提供了表型明显的Marker基因和基因功能的研究思路，同时也为飞蝗的绿色防控提供理论基础和应用潜力。
主权项：1.一种构建飞蝗雄虫体色Marker基因YellowProtein纯合突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）在飞蝗YellowProtein基因的2号外显子和5号外显子上各设计一个sgRNA靶标位点，通过体外转录合成sgRNA；（2）步骤（1）的sgRNA与Cas9蛋白体外融合形成RNP混合物，经显微注射注入飞蝗卵，获得飞蝗突变体；（3）提取步骤（2）的飞蝗突变体基因组后，利用靶点检测引物进行PCR检测，并对PCR产物进行测序，筛选突变检测成功的飞蝗突变体作为G0代突变体；（4）G0代突变体与野生型个体进行杂交得G1代，重复步骤（3）的检测，筛选得到G1代突变体；G1代突变体与野生型个体进行杂交得G2代，重复步骤（3）的检测，筛选得到G2代突变体；（5）G2代突变体经突变检测成功后，将雌雄突变类型一致的G2代突变体进行自交，得到G3代个体，筛选G3代个体中的纯合突变体经自交后获得飞蝗YellowProtein纯合突变体种群。
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权利要求：
百度查询： 河南大学 一种构建飞蝗雄虫体色Marker基因Yellow Protein纯合突变体的方法及其应用
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