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摘要：本发明涉及一种用于纳米镊子操作和多功能传感的变构茎环多组分DNAzyme。该发明利用茎环发夹降低背景信号，同时确保核酸酶的裂解效率。重要的是，阻断域中序列的自由设计使变构酶能够与复杂的纳米器件和扩增系统集成。与纳米镊子相结合，可适用于热力学或动力学驱动的过程，实现其在动态和耗散系统中的运行。利用核酸和RNaseH作为刺激，可构建具有时间响应性、可控性和可逆激活特性的纳米装置。此外，耦合HCR催化电路，可实现基于该策略的级联信号放大，用于检测包括核酸、蛋白酶和小分子等多种分子。本发明设计具有低泄漏、设计灵活、可扩展复杂性和系统兼容性等优点，将为创新纳米机器的制造、生物传感分析和疾病诊断开辟新的概念和策略。

主权项：1.本发明是一种用于纳米镊子操作和多功能传感的刺激响应变构核酸酶开关，其特征在于包括如下步骤：1DNA样品的制备：所有DNA寡核苷酸均溶于TE缓冲液中10mMTrisHCl，1mMEDTA，pH8，所有DNA复合物均在TM缓冲液10mMTrisHCl、1mMEDTA、12.5mMMgCl2，pH8中组装，纳米镊子与多组分DNAzymeT-Dz复合物和单个杂交链反应HCR发夹在T100ThermalCyclerPCRBio-Rad中退火：首先将样品加热至95℃，持续5分钟，然后以0.1℃s的恒定速率缓慢冷却至4℃；T-Dz复合物按1:1:1的比例退火，以确保复合物完全形成，退火完成后，所有预形成的成分在使用前均储存于4℃；2变构茎环酶调控信号的荧光测量：荧光信号由Rotor-Gene6000仪器记录；所有荧光信号在绿色通道470nm510nm下监测，激发和发射带宽均设置为5nm，对于所有实验，每10秒记录一次荧光数据；所有反应温度均设定为31℃；反应体积在PCR管中设置为20μL，增益设置为默认值，添加靶标后开始荧光动力学测量；空白荧光测量按照相同的步骤进行，需将添加靶标的步骤替换为TM缓冲液；信噪比SN的计算方法是将有目标物时的平均荧光信号除以无目标物时的信号SN＝FTFB，其中FT代表有靶标存在时获得的荧光信号，FB代表无靶标存在时的荧光信号；实验结果代表三次单独测量的平均值，误差条代表标准偏差SD。

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百度查询： 重庆医科大学国际体外诊断研究院 用于纳米镊子操作和多功能传感的变构茎环多组分DNAzyme