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申请/专利权人:遵义医科大学
摘要:一种基于模板有机合成检测碱性磷酸酶的方法,先将标准样品、待测样品分别和2‑磷酸‑抗坏血酸混合,反应,得到多个反应混合液;然后向修饰了叠氮基团的单链核酸、修饰了炔基基团的单链核酸和作为连接模板的修饰了荧光基团和猝灭基团的发夹结构核酸的混合溶液分别加入反应混合液,并分别加入铜离子和PBS缓冲溶液,反应后,分别检测反应体系的荧光强度;以已知碱性磷酸酶浓度为横坐标,相对的荧光强度值为纵坐标,绘制标准曲线,得到碱性磷酸酶浓度和荧光强度之间的线性关系方程,最后根据待测样品的荧光强度值,计算得出待测样品中碱性磷酸酶的浓度。该检测方法具有稳定性好、灵敏度高、抗干扰能力强、检测限低、线性响应范围宽等特点。
主权项:1.基于模板有机合成检测碱性磷酸酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一:将标准样品、待测样品分别与2-磷酸-抗坏血酸混合,得到多个反应体系,置于25℃~45℃水浴反应10min~60min,得到多个反应混合液;所述标准样品包括多个含有不同浓度碱性磷酸酶的溶液;步骤二:将修饰了炔基基团的单链核酸、修饰了叠氮基团的单链核酸和作为连接模板的修饰了荧光基团和猝灭基团的发夹结构核酸分别溶解在纯水中,配制成三种核酸溶液;步骤三:将步骤二配制的三种核酸溶液混合均匀,分别加入步骤一的多个反应混合液,再分别加入铜离子和PBS缓冲溶液混匀,形成多个反应体系,置于15℃~30℃水浴反应0.1h~2.5h后,检测多个反应体系的荧光强度;步骤四:以已知碱性磷酸酶浓度为横坐标,对应的荧光强度值为纵坐标,绘制标准曲线,得到碱性凝酸酶浓度和荧光强度之间的线性关系方程,然后根据待测样品的荧光强度值,计算得出待测样品中碱性凝酸酶的浓度。
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百度查询: 遵义医科大学 一种基于模板有机合成检测碱性磷酸酶的方法
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