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申请/专利权人：甘肃农业大学;甘肃祁连牧歌实业有限公司;海东市万牧农牧业发展有限公司

摘要：本发明公开了血红蛋白亚铁螯合肽及其制备方法和用途，包括：新鲜牛血中加入复配抗凝剂，之后采用高压微射流均质机在均质压力为100～170MPa时，对血红细胞溶液进行2～4次循环处理，过滤除去细胞残渣，冷冻干燥后得到血红蛋白粉，用胃蛋白酶和木瓜蛋白酶分步水解制备血红蛋白蛋白水解液，收集血红蛋白蛋白水解液中分子量小于1KD的组分并干燥，得到血红蛋白肽，所血红蛋白肽溶解于磷酸盐缓冲液中，加入硫酸亚铁，进行液相螯合，结束后收集沉淀，得到血红蛋白亚铁螯合肽。本发明的制备方法操作简单和成本低廉，且制备的血红蛋白亚铁螯合肽具有分子量小、补铁效果好和抗氧化性能强等特点。

主权项：1.一种血红蛋白亚铁螯合肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：新鲜牛血中加入2%（wv）的复配抗凝剂混匀后，过滤去除血液中的杂质，然后于转速3000~5000rpm离心10~15min，弃去上层血浆，再加入3~5倍体积的生理盐水，重复离心3~5次，得到血红细胞，所述复配抗凝剂包含如下质量体积比的组分：柠檬酸6%、柠檬酸钠75%、三聚磷酸钠15%和氯化钠4%，预先将所述复配抗凝剂用5~9倍体积的水溶解，再与血液充分混合；之后采用高压微射流均质机在均质压力为120MPa时，对血红细胞溶液进行2~4次循环处理，使血红蛋白从血细胞中释放出来，过滤除去细胞残渣，冷冻干燥后得到血红蛋白粉；取所述血红蛋白粉，用胃蛋白酶和木瓜蛋白酶分步水解制备血红蛋白蛋白水解液，将所述血红蛋白蛋白水解液装入1KD超滤离心管中以转速4000~6000rpm离心15min，收集其中分子量小于1KD的组分并干燥，得到血红蛋白肽，制备所述血红蛋白蛋白水解液的方法包括：取所述血红蛋白粉，配置为浓度30mgmL的血红蛋白溶液，依次采用胃蛋白酶和木瓜蛋白酶进行两步法酶解，首先加入底物浓度5%（wv）的胃蛋白酶，调节溶液pH为2.5，于温度45℃酶解2小时，之后灭酶活；再加入底物浓度3%（wv）的木瓜蛋白酶，调节溶液pH为7，于温度50℃酶解2小时，灭酶后，离心取上清液，得到所述血红蛋白蛋白水解液；取所述血红蛋白肽溶解于磷酸盐缓冲液中，加入硫酸亚铁，硫酸亚铁质量与血红蛋白肽质量比1:2.4，然后于超声、水浴梯度升温和转速150rmin的条件下进行液相螯合，所述液相螯合结束收集沉淀，将所述沉淀干燥后得到血红蛋白亚铁螯合肽，所述磷酸盐缓冲液浓度为10mmolL，pH值为7.5；血红蛋白肽磷酸盐缓冲液中血红蛋白肽的浓度100gL；所述液相鳌合中，超声时间45min，超声功率为280W，所述梯度升温的条件为：第一次升温至25℃维持15min，第二次升温至35℃维持15min，第三次升温至40℃维持15min。

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