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申请/专利权人：杭州杰毅生物技术有限公司
申请日：2024-03-20
公开（公告）日：2024-07-05
公开（公告）号：CN118291653A
主分类号：C12Q1/689
分类号：C12Q1/689;C12Q1/6844;C12R1/19
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.07.23#实质审查的生效;2024.07.05#公开
摘要：本发明公开了一种基于LAMP扩增和CRISPRCas检测相结合的大肠埃希氏菌检测试剂盒，包括：大肠埃希氏菌ompF基因的特异性扩增引物、能够引导CRISPRCas蛋白酶识别靶序列的sgRNA、DNA聚合酶和CRISPRCas蛋白酶、荧光报告探针。并公开了特异性扩增引物和sgRNA的组合，以及利用所述试剂盒检测大肠埃希氏菌的方法。本发明利用ompF基因缺失的大肠杆菌表达纯化得到的DNA聚合酶和CRISPRCas蛋白酶作为反应酶，并针对ompF基因序列设计特异性引物结合sgRNA加强特异性识别，提高了病毒特征序列核酸检测的准确性，排除假阳性。本发明检测时间快，特异性强，适用于活菌检测且操作简单，对温控要求低，对设备要求低，实现自动化操作。
主权项：1.一种基于LAMP扩增和CRISPRCas检测相结合的大肠埃希氏菌检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：大肠埃希氏菌ompF基因的特异性扩增引物、能够引导CRISPRCas蛋白酶识别靶序列的sgRNA、DNA聚合酶和CRISPRCas蛋白酶、荧光报告探针；所述DNA聚合酶和CRISPRCas蛋白酶是通过构建包含DNA聚合酶、CRISPRCas蛋白酶的编码基因的表达载体，转化入敲除了ompF基因的基因工程菌，表达DNA聚合酶、CRISPRCas蛋白酶，然后纯化获得。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 杭州杰毅生物技术有限公司 一种基于LAMP扩增和CRISPR/Cas检测相结合的大肠埃希氏菌检测试剂盒
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