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申请/专利权人：北京森康生物技术开发有限公司
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种去除宿主大肠杆菌核酸残留的TaqDNA聚合酶的纯化方法。该纯化方法通过以下步骤实现：（1）菌体破碎；（2）除宿主核酸；（3）热处理；（4）盐析；（5）使用储存缓冲液溶解沉淀，得到去除宿主核酸的TaqDNA聚合酶。使用本发明的方法纯化TaqDNA聚合酶，极大程度的去除了大肠杆菌的核酸，可应用于大肠杆菌荧光PCR的检测中，且操作过程简单，大大简化了纯化流程，适合大规模工厂化生产；且本发明提供的纯化方法，成本低，产量较高，应用于大肠杆菌荧光PCR的检测中，在灵敏度方面，检测极限可达到100copiesμL，并且特异性好，无假阳性结果出现。
主权项：1.一种去除宿主大肠杆菌核酸残留的TaqDNA聚合酶的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）菌体破碎：将含有TaqDNA聚合酶重组质粒的大肠杆菌发酵液离心收集，去除培养基，然后用菌体重悬液重悬大肠杆菌，加入裂解结合缓冲液，高压均质后离心得上清液Ⅰ；（2）除宿主核酸：向上清液Ⅰ中加入宿主DNA消化液，室温放置一定时间后再加入PEI水溶液，静置后离心去除沉淀，得上清液Ⅱ；（3）热处理：将上清液Ⅱ进行水浴处理，然后离心得上清液Ⅲ；（4）盐析：量取上清液Ⅲ加入硫酸铵，静置后高速离心得沉淀；（5）使用储存缓冲液溶解沉淀，得到去除宿主核酸的TaqDNA聚合酶。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京森康生物技术开发有限公司 一种去除宿主大肠杆菌核酸残留的Taq DNA聚合酶的纯化方法
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