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申请/专利权人：浙江省农业科学院;杭州佳嘉乐生物技术有限公司
申请日：2024-03-06
公开（公告）日：2024-07-05
公开（公告）号：CN118291578A
主分类号：C12Q1/04
分类号：C12Q1/04;C12Q1/34;C12N1/20;C12N9/80;C12R1/01
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.07.23#实质审查的生效;2024.07.05#公开
摘要：本发明涉及一种产生R‑酰胺酶拆分特定底物菌株及其筛选方法。本发明通过初筛、复筛、立体选择性鉴定、分子生物学鉴定筛选得到一株产生R‑酰胺酶的菌株；利用微生物产生的R‑酰胺酶拆分特定底物，高效且无污染。
主权项：1.一种产生R-酰胺酶拆分特定底物菌株的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：A1、将土样加入无菌水，震荡静置取上清液，加入YPD培养基中进行富集培养，得到富集培养液；A2、取A1步骤得到的富集培养液，涂布于筛选培养基中培养，挑取单菌落接种至新的筛选培养基进行纯化，得到纯化菌株并接种至发酵培养基，发酵并取上清液；A3、取A2步骤中所得上清液、羟胺类化合物溶液、缓冲液、酰胺酶底物溶液，反应3-6h；A4、取一定量A3步骤中反应液，并加入显色剂，观察显色反应，根据显色结果判断反应液中酰胺酶的活性；同时，取A3步骤中不同发酵时间段的发酵菌液，过滤，检测滤液中酰胺酶的光学选择性；A5、根据A4步骤中验证正确的菌株，LB液体培养基中培养，提取菌株基因组，扩增16SrDNA，进行测序，将测序结果上传至NCBI比对构建系统进化树，确定菌种种属。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江省农业科学院 杭州佳嘉乐生物技术有限公司 一种产生R-酰胺酶拆分特定底物菌株及其筛选方法
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