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申请/专利权人：南方科技大学
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种制备全基因组R‑loop测序文库的方法、全基因组R‑loop检测方法。本发明建立了一个能广泛兼容各类材料，并准确且稳定的检测R‑loop位点的建库方案。本发明开发了一个高效提基因组方案，能去除双链及单链RNA，大量杂质，同时保留R‑loop，并具有极高得率；本发明的建库方法选择恰当的片段化方案，减少序列偏好与样品损耗；本发明进一步优化了免疫沉淀流程，保证得率的同时尽可能地减少s9.6抗体非特异性结合；本发明设计了单链建库方案，保留链特异性，尽可能地提高建库效率，减少随机误差。
主权项：1.一种制备全基因组R-loop测序文库的方法，其特征在于，包括：1提取待测样本的基因组DNA，纯化获得含有R-loop结构的DNA样本；2对所述DNA样本进行一次片段化处理，获得片段化DNA样本；3对所述片段化DNA样本进行一次免疫沉淀处理，获得纯化样本1；4利用TN5酶对所述纯化样本1进行消化处理，二次片段化并连接P5接头；5对经消化处理的样本进行二次免疫沉淀处理，获得纯化样本2；6在所述纯化样本2中核酸的末端连接P7接头；7对连接有P5、P7接头的DNA样本进行PCR扩增，完成文库构建，其中，所述一次免疫沉淀处理和二次免疫沉淀处理各自独立地利用失活RNaseH或s9.6抗体与片段化DNA样本中核酸结合。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南方科技大学 制备全基因组R-loop测序文库的方法
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