申请/专利权人：艾普拜生物科技(苏州)有限公司

申请日：2023-07-25

公开（公告）日：2024-05-17

公开（公告）号：CN116837142B

主分类号：C12Q1/70

分类号：C12Q1/70;C12Q1/6806;C12R1/93

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.17#授权;2023.10.24#实质审查的生效;2023.10.03#公开

摘要：本发明提供了一种断裂点簇集区·艾贝尔逊白血病病毒校准品及应用，校准品包括以下组分：WS1、WS2、WS3、WS4、WS5各一管。其中，最低校准品WS5的检测范围可以达到0.001％ISMR5.0，并且能够作为第三方校准品对荧光定量PCR检测平台及数字PCR检测平台进行校准使用，该套校准品还适用于荧光定量PCR及数字PCR对断裂点簇集区·艾贝尔逊白血病病毒进行检测的试剂盒。

主权项：1.一种断裂点簇集区·艾贝尔逊白血病病毒融合基因BCR-ABL1校准品，其特征在于，包括以下组分：WS1、WS2、WS3、WS4、WS5各一管；所述WS1、WS2、WS3、WS4、WS5为K562细胞和HL60细胞的混合物；所述WS1、WS2、WS3、WS4每一管中的细胞总数量为1.5×106～1.8×106，WS5的细胞总数量为3×106～5×106；所述校准品按细胞数量百分比计，所述WS1为K562细胞数量和HL60细胞数量以0.1～1％的比例进行混合的细胞混合物；所述WS2为K562细胞数量和HL60细胞数量以0.01～0.1％的比例进行混合的细胞混合物；所述WS3为K562细胞数量和HL60细胞数量以0.001～0.01％的比例进行混合的细胞混合物；所述WS4为K562细胞数量和HL60细胞数量以0.0001～0.001％的比例进行混合的细胞混合物；所述WS5为K562细胞数量和HL60细胞数量以0.00001％～0.0001％的比例进行混合的细胞混合物；所述校准品BCR-ABL1拷贝数与ABL1拷贝数的％IS值的合格范围分别为：WS1％IS值：3.1623～31.6228％；WS2％IS值：0.3162～3.1623％；WS3％IS值：0.0316～0.3162％；WS4％IS值：0.0032～0.0316％；WS5％IS值：0.0003～0.0032％。所述校准品的制备方法包括以下步骤：S1：将K562细胞和HL60细胞经过培养,培养至两种细胞的数量及活力必须达到要求后方可进行校准品的配制；S2：对达标的K562细胞使用细胞保存液稀释至每毫升细胞保存液中含2×106个细胞的K562细胞悬浮液，对达标的HL60细胞使用细胞保存液稀释至每毫升细胞保存液中含3×107个细胞的HL60细胞悬浮液，吹吸混匀细胞悬浮液并进行记录，为防止细胞产生沉降，每次吸取细胞悬浮液或者细胞混合物之前应至少吹吸5次，以保证细胞在细胞悬浮液中充分悬浮；S3：按照WS1所需的细胞总数及细胞数量混合比例计算出所需K562和HL60细胞悬浮液的体积并吸取相应体积的细胞悬浮液混合成为WS1细胞混合液；S3.1：取WS1总体积的110体积的WS1细胞混合液与HL60细胞悬浮液进行混合成为WS2，其中HL60细胞悬浮液的使用体积为WS1中使用的HL60细胞悬浮液的910；S3.2：取WS2总体积的110体积的WS2细胞混合液与HL60细胞悬浮液进行混合成为WS3，其中HL60细胞悬浮液的使用体积为WS2中使用的HL60细胞悬浮液的910；S3.3：取WS3总体积的110体积的WS3细胞混合液与HL60细胞悬浮液进行混合成为WS4，其中HL60细胞悬浮液的使用体积为WS3中使用的HL60细胞悬浮液的910；S3.4：取WS4总体积的110体积的WS4细胞混合液与HL60细胞悬浮液进行混合成为WS5，其中HL60细胞悬浮液的使用体积为WS4中使用的HL60细胞悬浮液的910；S4：提取WS1至WS5的RNA后使用数字PCR方法测定BCR-ABL1拷贝数与ABL1拷贝数的％IS值，测定％IS值在合格范围内方可进行分装；S5：将断裂点簇集区·艾贝尔逊白血病病毒融合基因BCR-ABL1校准品WS1至WS5根据需要的分装量进行分装并于800g离心10min，设置转速缓降，离心后使用移液器轻轻吸净上清；S6：将分装好的断裂点簇集区·艾贝尔逊白血病病毒融合基因BCR-ABL1校准品进行冻干处理，冻干后的校准品在2℃-8℃条件下保存，冻干程序如下表： 预冷 预热 主干燥 终末干燥 终末干燥 时间 4小时 20分钟 30小时 5小时 20小时 温度℃ -50 -50 -25 0 25 压力mbar 0.03 0.001 0.001 其中，步骤S2中细胞保存液为使用DEPC水配制的8mM磷酸氢二钠、2mM磷酸二氢钠、140mM氯化钠和10mM柠檬酸钠。

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