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申请/专利权人:广西壮族自治区动物疫病预防控制中心(广西壮族自治区屠宰技术中心)
摘要:本发明公开了一种猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流感病毒(SIV)和猪伪狂犬病毒(PRV)的多重RT‑qPCR试剂盒及检测方法;所述试剂盒包括如序列表中SEQIDNO.1~SEQIDNO.12所示的引物和探针。所述的检测方法是将猪组织样品、棉拭子等样品进行总RNADNA提取后,以得到的总RNADNA作为模板,再加入如序列表SEQIDNO.1~SEQIDNO.12所示引物和探针配制得到的扩增反应液中并进行扩增,然后通过荧光定量PCR仪自带软件绘制扩增曲线并读取相应的Ct值并进行结果判定,确定并区分PRCV、PRRSV、SIV和PRV四种病毒。本发明方法具有特异性好、灵敏度高的优点,能够同时检测上述四种病毒,为实验室快速、准确的检测区分上述病毒株提供了有效的技术手段。
主权项:1.一种PRCV、PRRSV、SIV和PRV的多重RT-qPCR试剂盒,其特征在于:包括以下引物和探针:引物F1的序列如序列表SEQIDNO.1所示为CTGGGGYTGAAGTCGA;引物R1的序列如序列表SEQIDNO.2所示为GGTCATCTTTAGCAGATACT;探针A的序列如序列表SEQIDNO.3所示为VIC-TCTGAAGGTGCTGAAGGGATTTCTT-BHQ1;引物F2的序列如序列表SEQIDNO.4所示为GCCAGATGCTGGGTAAGAT;引物R2的序列如序列表SEQIDNO.5所示为CATCTTCAGTCGCTAGAGGAAA;探针B的序列如序列表SEQIDNO.6所示为FAM-AAACCAGTCCAGAGGCAAGGGAC-BHQ1;引物F3的序列如序列表SEQIDNO.7所示为TGGGATCTTGCACCTGATATTG;引物R3的序列如序列表SEQIDNO.8所示为CACTCTGCTGTTCCTGTTGAT;探针C的序列如序列表SEQIDNO.9所示为Texasred-TACGGAAGGAGTGCCTGAGTCCAT-BHQ2;引物F4的序列如序列表SEQIDNO.10所示为GAGGCCCTGGAAGAAGTTG;引物R4的序列如序列表SEQIDNO.11所示为TCCTGGACTACAGCGAGAT;探针D的序列如序列表SEQIDNO.12所示为CY5-CGATGTCGTAGAACTTGAGCGCGT-BHQ3。
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权利要求:
百度查询: 广西壮族自治区动物疫病预防控制中心(广西壮族自治区屠宰技术中心) PRCV、PRRSV、SIV和PRV的多重RT-qPCR试剂盒及检测方法
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