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申请/专利权人:锦州医科大学
摘要:一种RT‑RPA‑侧流层析双重检测蜜蜂残翅病毒和黑蜂王台病毒的引物、探针及检测方法,包括:应用于RT‑RAP扩增技术蜜蜂残翅病毒Helicase基因序列的上游引物、中间探针与下游引物和或黑蜂王台病毒VP1基因序列的上游引物、中间探针与下游引物,及其反应体系。使用该检测方法及配合测流层析试纸条能够快速、灵敏、特异地、在非实验室环境下也可以现场检测检测样本中蜜蜂残翅病毒Helicase基因和或黑蜂王台病毒VP1基因。
主权项:1.一种RT-RPA-侧流层析双重检测蜜蜂残翅病毒和黑蜂王台病毒的引物、探针组合,其特征是:具体为具体为检测蜜蜂残翅病毒Helicase基因和或黑蜂王台病毒VP1基因的引物对和探针;其中:残翅病毒Helicase基因的正向引物序列DWV-F为:5’-CTTGAGAAATATCACTTGGCGACGCAACCCCAG-3’;残翅病毒Helicase基因的反向引物序列DWV-R为:5’-Dig-TGAGCAGCCACATTAAGCATATTACACACACCA-3’残翅病毒Helicase基因的探针序列DWV-Probe为;5’-FAM-AGCTCCCAATGCTGAAGCGGAGGAGGCAAGTGCdSpacerTTGGGTATCCATTAT-C3spacer-3’黑蜂王台病毒VP1基因的正向引物序列BQCV-F为:5’-GAAACATTTTACTATAGTTCAGGTCGGAATAA-3’黑蜂王台病毒VP1基因的反向引物序列BQCV-R为:5’-Biotin-CATACCTCAAATCATACACTTTACCTTGTTTTA-3’黑蜂王台病毒VP1基因的探针序列BQCV-Probe为:5’-FAM-CTCGATATAGCCACTTCACCTCCTTCCATCAATCdSpacerCTATTATGCGGTAGGTG-C3spacer-3’;所述以残翅病毒Helicase基因的探针,其DWV-Probe所示序列5’端连接有第一标记分子,3’端连接有防止聚合反应的保护标签,在距离5’端30个碱基左右的位置具有能被DNA损伤修复活性的酶识别并切除的人工碱基;所述黑蜂王台病毒VP1基因的探针,其BQCV-Probe所示序列5’端连接有第一标记分子,3’端连接有防止聚合反应的保护标签,在距离5’端30个碱基左右的位置具有能被DNA损伤修复活性的酶识别并切除的人工碱基;所述残翅病毒Helicase基因的反向引物5’端连接有第二标记分子;黑蜂王台病毒VP1基因的反向引物5’端连接有第三标记分子。所述残翅病毒Helicase基因的探针和正向引物处于同一扩增方向;所述黑蜂王台病毒VP1基因的探针和正向引物处于同一扩增方向;防止聚合反应的保护标签为C3-spacer;能够被具有DNA损伤修复活性的酶识别并切除的所述人工碱基类似物为四氢呋喃THF;所述第一标记分子为荧光分子FAM,第二标记分子为地高辛Dig,第三标记分子为生物素Biotin。
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百度查询: 锦州医科大学 RT-RPA-侧流层析双重检测蜜蜂残翅病毒和黑蜂王台病毒的引物、探针及检测方法
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