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摘要：本发明属于检测技术领域，具体涉及一种高通量检测乳酸菌发酵基质溶液pH值的方法，其包括以下步骤：1选择酸碱指示剂；2通过玻璃电极pH计测定基质理论上的pH值；3基于分光光度法，使用单一指示剂检测基质的pHI值；4建立不同pH值基质的pHI‑pH校准曲线：以pHI值为横轴，pH值为纵轴，得出步骤2不同pH值基质的pHI‑pH校准曲线，计算建立校准曲线公式；5取待测基质发酵液与酸碱指示剂混合后，重复步骤3后续步骤，测得pHI值；6步骤3测得的pHI值代入步骤4中的校准曲线公式中，计算得到pH值。本发明方法能扩大指示剂的指示范围，不受样品体系限制，能够一次获得多组实验数据，使检测效率大幅提高。

主权项：1.一种高通量检测乳酸菌发酵基质溶液pH值的方法，其特征在于，包括以下步骤：1选择酸碱指示剂：根据基质的pH值变化范围，遴选酸碱指示剂；2通过玻璃电极pH计测定基质理论上的pH值：在步骤1所述的pH值范围内，用乳酸以0.1个增量调整基质pH值，获得多个不同pH值的基质，并以玻璃电极pH计测定结果作为基质理论上的pH值；3基于分光光度法，使用单一指示剂检测基质的pHI值：基于步骤2中不同pH值的基质，按其体积1100～7100比例加入酸碱指示剂，混合后加入96孔板中，保证每孔样品体积为100μL，通过酶标仪记录每个基质样品在波长λ1、λ2处的吸光度值A1和A2，分别减去对应空白吸光度值Ack1和Ack2，获得的吸光度值Aλ1、Aλ2，通过公式Ⅰ计算得到的pHI值；4建立不同pH值基质的pHI-pH校准曲线：以pHI值为横轴，pH值为纵轴，得出步骤2不同pH值基质的pHI-pH校准曲线，计算建立校准曲线公式；5取待测基质发酵液与酸碱指示剂混合后，重复步骤3后续步骤，测得pHI值；6步骤5测得的pHI值代入步骤4中的校准曲线公式中，计算得到pH值；所述步骤3中，公式Ⅰ为： 其中，λ1表示质子化指示剂的最大峰值波长，λ2是去质子化指示剂的最大峰值的波长，ελ1,HIn和ελ1,In是λ1波长下的吸收系数，ελ2,HIn和ελ2,In是波长λ2下的吸收系数，pKa为指示剂的酸度系数；所述空白吸光度值Ack1和Ack2计算具体为：取基质液于96孔微孔板中，于λ1、λ2处分别测量空白吸光度值Ack1和Ack2。

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百度查询： 广西壮族自治区农业科学院 一种高通量检测乳酸菌发酵基质溶液pH值的方法