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申请/专利权人：四川农业大学

摘要：本发明涉及新材料及分析检测技术领域，具体涉及一种具有抗氧化活性的硒谷胱甘肽纳米酶制备方法及应用，本发明提供的含硒纳米酶合成方法简单，由GSH，亚硒酸钠水热反应即可产生，产量高，操作简单；制备所得含硒纳米酶表征为球形，体积小，可有效得与金霉素结合，从而导致材料的荧光强度发生变化，检测条件简单，无需高温高压等特殊条件，37℃、pH＝8时反应迅速，待测物加入体系水浴25min后即可进行荧光比色。荧光强度变化明显，耗材较少节省时间；另含硒纳米酶对金霉素有很强的选择性，可保证检测结果的准确性，具有广泛应用前景；可用于检测多种食品和细胞中的金霉素，对于食品行业和细胞研究领域具有重要意义。

主权项：1.一种利用具有抗氧化活性的硒谷胱甘肽纳米酶检测金霉素的比色检测方法，其特征在于：具体步骤包括：S1：取适量鸡胸肉切成块，或整个鸡蛋，用均质机均质，将10.00g样品与25mL0.1molL，pH＝4.0的Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液混合，并将它们置于离心管中；充分搅拌和混合后，以3500rpm离心10min；取出上清液，向残留物中加入25mLNa2EDTA-Mcllvaine缓冲液以重复上述过程；最后，将所有上清液充分混合至50mL的恒定体积，并再次以3500rpm离心10min；用滤纸快速过滤上清液后，获得鸡肉或鸡蛋样品待测液，并在4℃下保存；得到食品待测液：S2：收集已培养的IPEC-J2细胞，PBS洗涤细胞样品1～2遍，超声波破碎离心，取上清液得IPEC-J2细胞待测液；S3：在pH＝8的PBS溶液1.9mL中，加入各25μL的硒谷胱甘肽纳米酶、过氧化氢、GSH及步骤S1或步骤S2所得待测液，总体积为2mL；将混合溶液加入光程为10mm的比色皿中，荧光分光光度计激发波长为330nm，发射波长为410nm，狭缝宽度为10nm；在0.02-1μM范围内，410nm处的荧光强度与CTC的浓度呈线性关系，进行待测液中金霉素的比色检测；反应温度为37℃，pH＝8，反应时间为25min；所述待测物包括但不限于鸡肉、鸡蛋、含蛋类食品与IPEC-J2细胞；所述硒谷胱甘肽纳米酶制备方法包括以下步骤：S1：分别称取0.014g谷胱甘肽和0.05g的Na2SeO3加入反应釜中，其摩尔浓度比为GSH:Na2SeO3＝2:1，然后快速加入20mL的纯水；S2：迅速摇匀后旋紧反应釜，将反应釜置于180℃烘箱中反应3h；S3：反应结束后取出反应釜，冷却至室温后打开，将溶液倒入50mL离心管中，2000rmin离心5min后取上清液，最终得到硒谷胱甘肽纳米酶；制备所得的硒谷胱甘肽纳米酶形貌均由球状聚集体组成，平均粒径为350nm，主要组成元素为CSe；所述硒谷胱甘肽纳米酶具有荧光特性，荧光激发波长为330nm，发射波长为410nm；所述硒谷胱甘肽纳米酶检测食品及细胞中金霉素的比色检测方法，包括在PBS缓冲液中加入各25μL的GSH、H2O2、硒谷胱甘肽纳米酶及待测物进行反应；之后进行荧光比色。

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百度查询： 四川农业大学 一种具有抗氧化活性的硒谷胱甘肽纳米酶制备方法及应用