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申请/专利权人:浙江微景生物科技有限公司
摘要:本发明涉及体外苯丙氨酸羟化酶活力的测定方法,采用一种体外酶体系进行酶活力反应,酶体系包括:苯丙氨酸羟化酶,L‑色氨酸、MH4、硫酸铵、二硫苏糖醇、硫酸亚铁铵和过氧化氢酶,前处理时间短(约30min),反应在37℃水浴锅中进行,37℃的反应温度更接近动物体温,反应时间(约30min)更合理;反应计时结束后,采用分光光度法测定苯丙氨酸羟化酶活力,取待测液,滴加1%KOH乙醇溶液,使pH9~10;再加入0.5%2,6‑二氯苯醌氯亚胺乙醇溶液,充分振荡混合均匀,室温静置10min,于606nm波长下检测吸光度,根据标准曲线计算出待测液中5‑羟基色氨酸的产生量,进一步计算得出酶活值。本发明酶体系能够进行5‑羟基色氨酸的体外高效酶法合成,酶活检测方法精密度符合要求,检测结果重复性好。本方法适用于体外苯丙氨酸羟化酶相关检测。该方法设备要求简单、简单易行、耗时短、成本低,且可以排除色氨酸及其他氨基酸、肽和蛋白质的干扰,具有良好的专一性、准确性和重现性。
主权项:1.体外苯丙氨酸羟化酶活力的测定方法,其特征在于,包括以下步骤:体外酶反应体系制备和待测样品中5-羟基色氨酸浓度测定两个方面。
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