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申请/专利权人：安徽农业大学
摘要：本发明公开了一种适用于ATAC‑seq测序的玉米胚乳提核方法。包括以下步骤：1从玉米种子中取大约5g胚乳，研磨成粉末。2将10mL体积的蔗糖缓冲液添加到每份样品中，充分混匀，通过100um孔筛过滤。3将上面的滤液通过38um孔网。再将产物以700*g离心5分钟，收集上清液。4将上清液通过38um筛网过滤并以2000*g离心5分钟，去除上清液，将沉淀悬浮在10mL蔗糖提取缓冲液中。5再次通过38um筛孔过滤，2000*g离心5‑10分钟。去除上清液，将沉淀重悬于5mLpbs。取10‑20uL使用DAPI等体积染色10分钟，在荧光显微镜下观察。本发明制备得到的胚乳细胞核数量多、活性高，可以克服储藏组织淀粉含量高的影响，为后续单细胞测序、CUTTAG、ATAC‑seq等相关研究提供有力的技术支持，提取效果也会对实验数据产生重要影响。
主权项：1.一种适用于ATAC-seq测序的玉米胚乳提核方法，其特征在于，包括以下步骤：1从玉米种子中取出种皮，胚，收集胚乳长期保存于-80℃中，取大约5g如15DAP为5颗胚乳，在液氮中手动研磨成粉末；2将10mL体积的蔗糖缓冲液添加到每份粉末样品中，充分混匀，再通过100um孔筛过滤；3将上面的滤液再通过38um孔网。然后将产物以700*g离心5分钟沉淀淀粉粒。收集上清液；4将上清液通过38um筛网过滤并以2000*g离心5分钟。去除上清液，然后将沉淀重新悬浮在10mL蔗糖提取缓冲液中；5再次通过38um筛孔过滤，2000*g离心5-10分钟。去除上清液，然后将沉淀重悬于5mL的重悬缓冲液；6再以1000*g离心5min后，弃去上清液，将沉淀悬浮在5ml的pbs溶液含100ul的50×蛋白酶抑制剂中，取10-20uL使用DAPI等体积染色10分钟，在荧光显微镜下观察。取1-5uL稀释成一定倍数，细胞核数L＝N4×10×倍数×106＝N4×107×倍数。
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百度查询： 安徽农业大学 一种适用于ATAC-seq测序的玉米胚乳提核方法
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