买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：湘潭大学

摘要：本发明公开了一种测量循环肿瘤细胞CTCs穿过微流控多孔滤膜芯片中孔道的时间的方法。该发明包括：1搭建多孔滤膜微流控芯片的CTCs过滤捕获实验系统；2对CTCs荧光染色并开展过滤捕获实验，利用荧光显微镜和相机拍摄滤膜上CTCs捕获的荧光图像；3通过图像处理得到捕获的CTCs数量，进而求得CTCs的捕获效率；4对CTCs穿孔进行动力学分析，计算单个肿瘤细胞的过孔时间，同时分析过孔时间、溶液注入时间和通过细胞个数的关系，得到过孔时间和捕获效率的关系式；5将实验测得的捕获效率代入关系式即可得到一个循环肿瘤细胞的过孔时间。本发明提出的方法简单、实用性强，对微流控多孔膜自动过滤分离CTCs系统的研发、提高CTCs的捕获效率具有重要指导意义。

主权项：1.一种测量循环肿瘤细胞穿过多孔滤膜微流控芯片中孔道的时间的方法，包括：步骤1：设计并制备含有多孔滤膜的CTCs捕获微流控芯片，搭建包含注射泵、注射器、导管、多孔滤膜微流控芯片、荧光显微镜、CCD相机和计算机的CTCs过滤捕获实验系统；步骤2：提取含CTCs的血液，在血液中放入抗凝剂，并根据情况对含CTCs的血液进行适当稀释，得到含CTCs的血溶液；对溶液中的CTCs进行荧光染色；对溶液的适当搅拌，使得溶液中的CTCs均匀分布；CTCs的浓度为c，单位是：个m3；步骤3：开展CTCs过滤实验，将制备好的溶液通过注射器、导管和注射泵，以固定流量Q注入CTCs捕获微流控芯片；注射的总时长为texam，从0时刻开始，每隔Δt时间，利用多孔滤膜上方的荧光显微镜和CCD相机，拍摄得到多孔滤膜平面上的荧光强度分布图像，由此得到一组实验图像Pti，其中，ti为拍摄图片对应的时刻，i＝0,1,2,…,n，且n＝texamΔt，Δt将总时长texam等分成n段，n为整数；步骤4：对实验图像Pti进行处理，根据荧光强度得到每张图片的多孔滤膜捕获到的CTCs的数量Ncatchti；定义CTCs的捕获效率为多孔滤膜捕获到的CTCs的数量除以注入溶液中总的CTCs的数量；根据流量Q和时间ti，计算实验ti时间后注入的溶液体积Vti和总共注入的CTCs数量Nsumti，其中Vti＝Q×ti、Nsumti＝Vti×c；NcatchtiNsumti即为此ti时刻的CTCs的捕获效率ηexamti；步骤5：选取细胞力学模型中的液滴模型来描述细胞，利用牛顿第二定律对CTCs穿过孔道进行动力学分析，得到一个循环肿瘤细胞的过孔时间tcell，同时将溶液体积按照CTCs个数等分，分析CTCs穿过孔道时间、溶液注入时间和穿过细胞个数的关系，得到CTCs捕获效率η和tcell的关系式，tcell＝tcellη；其中，流体物性参数、芯片滤膜尺寸、流量条件确定后，tcell是一个相对稳定的值，η是时间t的函数，η＝ηt，将ti带入后能够得到不同时刻的CTCs捕获效率；步骤6：将步骤4中ti时刻对应的捕获效率ηexamti代入步骤5中的关系式tcell＝tcellη，即可得到ti时刻对应的一个循环肿瘤细胞的过孔时间tcellti；考察所有ti时刻对应的一个循环肿瘤细胞的过孔时间tcellti，分析其随时间ti的变化规律；由于流体物性参数、芯片滤膜尺寸、流量条件确定后，同种细胞的过孔时间是一个相对稳定的值，则通过求平均值最终确定一个循环肿瘤细胞的过孔时间tcell；步骤7：改变流体物性参数、芯片滤膜尺寸、流量、肿瘤细胞种类条件，进行步骤1至步骤6的实验、分析研究过程，得到不同条件、不同种类CTCs的过孔时间tcell。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 湘潭大学 一种测量循环肿瘤细胞穿过多孔滤膜微流控芯片中孔道的时间的方法