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申请/专利权人：甘肃省科学院传感技术研究所

摘要：一种特异性核酸探针、核酸富集法及形成的沙门氏菌检测方法，特异性核酸探针由沙门氏菌Inva基因设计合成，包括5'端修饰氨基用于连接羧基磁珠的捕获探针和3'端修饰TAMRA‑N用于信号检测的检测探针，其中捕获探针3'端和检测探针5'端分别跟待测沙门氏菌特定核酸序列结合形成磁性探针‑待测核酸片段‑检测探针的复合物；待测核酸片段由建立的可放大信号的核酸富集纯化技术提取富集，最后通过检测荧光强度以及标准曲线得到沙门氏菌浓度，达到特异性定量检测沙门氏菌的目的。本发明提供的沙门氏菌检测方法无需增菌，具有高特异性，高灵敏度，可检测实际样品（复杂环境）中微量沙门氏菌，提高了检测灵敏度，同时提高了检测效率。

主权项：1.一种非疾病诊断和治疗为目的的沙门氏菌检测方法，其特征在于，它包括如下步骤：（1）将合成的捕获探针溶于水中形成浓度为100mM的捕获探针溶液待用；该捕获探针序列5'端标记有氨基NH2，其序列为5'-NH2-TTTTTTTGGTTGTTACGGCTATTC-3'；（2）将羧基磁珠分散于磷酸盐缓冲液PBS，加入步骤（1）中所述捕获探针溶液，37℃孵育反应后磁分离弃上清，得到负载特异性核酸探针的磁性探针；（3）细菌培养液微孔滤膜过滤，分散于裂解缓冲液，加入10μL蛋白酶K，37℃反应15min，得到裂解培养液；（4）裂解培养液依次分别加入内切酶室温静置反应5min，得到待测样品核酸片段，所述内切酶包括HindIII和EcoRI；（5）在所述待测样品核酸片段中加入磷酸盐缓冲液PBS混悬，然后加入步骤（2）所得的磁性探针，混匀后静止15min，所述捕获探针3'端和待测沙门氏菌的核酸序列：Inva基因序列3’…TAACCAACAATGCCGATAAGACTGG…5’结合，得到混悬液待用；（6）在步骤（5）混悬液中加入检测探针，该检测探针序列3'端标记有荧光素TAMRA-N，其序列为5'-ATGCTGTTATCGCTCACGTTTTTTT-TAMRA-N-3'；混匀后静置30min，所述检测探针5'端和待测沙门氏菌的核酸序列：Inva基因序列3’…ATGTTACGACAATAGCGAGTGCGGGA…5’结合；磁分离弃上清，用磷酸盐缓冲液PBS充分洗涤，得到磁性探针-待测核酸片段-检测探针复合物，将其转移至石英比色皿中，检测其在580nm处的荧光强度；（7）与沙门氏菌浓度的标准曲线进行对比，计算待测样品中沙门氏菌的浓度。

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