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申请/专利权人：中国水产科学研究院黄海水产研究所

摘要：本发明属于微生物检测技术领域，具体涉及甲壳类Amesonspp.微孢子虫的检测引物和探针及其应用。本发明针对Amesonspp.的SSUrRNA基因的保守核酸区域，提供了可用于Amesonspp.检测的实时荧光定量PCR和等温扩增的引物。使用本发明所述引物和探针进行荧光定量PCR的检测灵敏度为4.58拷贝反应，灵敏度高，特异性强。本发明提供的等温扩增的检测引物及检测方法，可在简易条件下完成样品的现场快速诊断，具有Amesonspp.检测试剂盒的开发应用前景。

主权项：1.一种甲壳类Amesonspp.微孢子虫的检测引物和探针，其特征在于：所述的引物和探针的核苷酸序列如下：（1）4套荧光定量PCR检测引物及探针的核苷酸序列如下：第一套引物和探针的核苷酸序列：1）引物1Ameson-F：5’-ATTTGGTGTCAGCTAATGGTATGG-3’，2）引物2Ameson-R：5’-TTGTCAGTGCTTTCGCCTTTG-3’，3）探针Ameson-Probe：5’–TGAAGTCTGAGGATCCA-3’；第二套引物和探针的核苷酸序列：1）引物1Ameson-F：5’-ATTTGACTCAACGCGGGAAA-3’，2）引物2Ameson-R：5’-GCCATGCACCACCATTTTAC-3’，3）探针Ameson-Probe：5’-ACCAAGCTTATTTATTCAACG-3’；第三套引物和探针的核苷酸序列：1）引物1Ameson-F：5’-GTTGCGGTTAAAACGTCCGT-3’，2）引物2Ameson-R：5’-TTTCCAGCTTGCTACTGCCC-3’，3）探针Ameson-Probe：5’-CTGACCTGTAATCTATTTGG-3’；第四套引物和探针的核苷酸序列：1）引物1Ameson-F：5’-ACTGGAGGGAAAGTCTGGTG-3’，2）引物2Ameson-R：5’-CGCGACTACGGACGTTTTAA-3’，3）探针Ameson-Probe：5’-CAGCAGCCGCGGTA-3’；（2）4套等温扩增检测引物的核苷酸序列如下：第一套引物的核苷酸序列：1）引物1Ameson-F3：5’-CGGTAATACCAGCTCCAGGA-3’，2）引物2Ameson-B3：5’-GCCTCTGTCCTTGATCAACA-3’，3）引物3Ameson-FIP：5’-TCCAGCTTGCTACTGCCCCTATTTTTTTAAAACGTCCGTAGTCGCG-3’，4）引物4Ameson-BIP：5’-AGCTAATGGTATGGGGAGGGGTTTTTGCTTTCGCCTTTGCTCCTC-3’，5）引物5Ameson-LF：5’-AAATAGATTACAGGTCAGTCCCAAG-3’；第二套引物的核苷酸序列：1）引物1Ameson-F3：5’-GCTTGGGACTGACCTGTA-3’，2）引物2Ameson-B3：5’-CGTATTCGATCCTCTAGCCT-3’，3）引物3Ameson-FIP：5’-CATACCATTAGCTGACACCAAATTGTTTTGTCAACAGATAGATAGGGGC-3’，4）引物4Ameson-BIP：5’-GAGGGGTGAAGTCTGAGGATTTTTTTGATCAACAGAATCAATCTTTGTC-3’，5）引物5Ameson-LF：5’-TCTTTTCCAGCTTGCTACT-3’，6）引物6Ameson-LB：5’-CCATGCAGGAGGAGCA-3’；第三套引物的核苷酸序列：1）引物1Ameson-F3：5’-GATCGAATACGATTAGATACCG-3’，2）引物2Ameson-B3：5’-TTGGTAAGTTTTCCCGCG-3’，3）引物3Ameson-FIP：5’-TCCCCCCGGAGATCTATTTTGATTTTTTAGTAGTTCTAGCAGTGACCG-3’，4）引物4Ameson-BIP：5’-GTACATGCGCAAGCAAGAAACTTTTTTGAGTCAAATTAAGCCGAAC-3’，5）引物5Ameson-LB：5’-AAAGAAATTGACGGAAGACTACCAC-3’；第四套引物的核苷酸序列：1）引物1Ameson-F3：5’-GTAAAATGGTGGTGCATGG-3’，2）引物2Ameson-B3：5’-TGTTCATGAGTGCTTTTCAG-3’，3）引物3Ameson-FIP：5’-TCTTTCGAACAAGCTATTCTGAGATTTTTCAGATGGAGTGATTTTGTGAT-3’，4）引物4Ameson-BIP：5’-TGCACGCGCAATACAATGTTTTTTCCCTCAATCCCTCATGTT-3’。

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百度查询： 中国水产科学研究院黄海水产研究所 甲壳类Ameson spp.微孢子虫的检测引物和探针及其应用