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申请/专利权人：华普生物技术(河北)股份有限公司;江苏泰普瑞生物技术有限公司

摘要：本发明公开了LC‑MS检测寡核苷酸类化合物纯度及其中有关物质的方法。本发明提供的方法包括如下步骤：将待测样品加水溶解或稀释，配制待测溶液；先对所述待测溶液进行液相色谱检测，再进入到质谱检测器并通过质谱对液相图谱中未达到基线分离的部分进行分析；根据所述液相色谱和所述质谱的检测结果，对所述样品中寡核苷酸类化合物的纯度及其中有关物质进行定量分析。本发明提供的方法解决了CpGODN目标序列与N+、N‑、P＝O杂质难以区分的问题，实现了对CpGODN等目标序列纯度及有关物质的准确检测。

主权项：1.一种检测寡核苷酸类化合物纯度及其中有关物质的方法，包括如下步骤：S1、将待测样品加水溶解或稀释，配制待测溶液；S2、先对所述待测溶液进行液相色谱检测，再进入到质谱检测器并通过质谱对液相图谱中未达到基线分离的部分进行分析；S3、根据所述液相色谱和所述质谱的检测结果，对所述样品中寡核苷酸类化合物的纯度及其中有关物质进行定量分析；步骤S2中，所述色谱检测的条件如下：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；柱温：60-70℃；流速：0.2mLmin；紫外检测器波长：260nm；进样量：5μL；所述色谱检测使用的流动相如下：流动相A为含有90-120mM六氟异丙醇、7-10mM三乙胺、143-239mM乙腈的水溶液；流动相B由体积分数60-80%流动相A和体积分数20-40%乙腈组成；洗脱梯度如下：在0min时，流动相A为90%，流动相B为10%；在5min时，流动相A为81%，流动相B为19%；在8min时，流动相A为79%，流动相B为21%；在13min时，流动相A为70%，流动相B为30%；在14min时，流动相A为90%，流动相B为10%；在20min时，流动相A为90%，流动相B为10%；步骤S2中，所述质谱检测的条件为：离子源：电喷雾离子源ESI；离子极化模式：负离子模式；毛细管电压：2.5kV；锥孔电压：5-10V；离子源温度：75-100℃；脱溶剂温度：300-400℃；锥孔气流速：50Lh；脱溶剂气流速：600Lh；步骤S3中，所述寡核苷酸类化合物中有关物质的分析检测步骤如下：对于能够通过液相色谱分离的有关物质，在液相色谱图中按照面积归一法进行有关物质的计算；对于不能通过液相色谱分离的有关物质，进入质谱后根据各自的质谱强度和占比进行计算；计算公式如下：有关物质质量分数%=PUV%×PMS有关物质%其中：PUV%=主峰峰面积总峰面积×100%PMS有关物质%=主峰中有关物质质谱强度主峰中所有总质谱强度×100%；步骤S3中，所述寡核苷酸类化合物纯度是根据所述液相色谱检测和所述质谱检测的检测结果进行计算；计算公式如下：纯度%=PUV%×PMS主成分%其中：PUV%=主峰峰面积总峰面积×100%PMS主成分%=主峰中主成分质谱强度主峰中所有总质谱强度×100%。

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