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申请/专利权人：湖南农夫哥农业开发有限公司

摘要：本发明提出了一种灰毡毛忍冬组织培养方法，包括选择含腋芽茎段为外植体，依次经过诱导培养、继代增殖培养、过渡培养和生根培养，诱导培养至生根形成。本发明在诱导培养阶段采用NAA和6‑BA结合，继代增殖培养阶段采用6‑BA和生物素D搭配，同时增设了过渡培养阶段，选择苹果汁、CPPU与IBA进行组合，最后生根阶段再次采用苹果汁和NAA，对灰毡毛忍冬的组织培养具有较好的生根效果，有效缩短组培苗生根时间，且组培苗诱导得到的生根粗壮且多，有助于后续移栽时为组培苗的吸水、吸肥能力奠定一定基础，提高移栽成活率。本发明增设的过渡培养阶段，可以结合液体培养的模式进行，可使灰毡毛忍冬组培苗生根多，不仅粗壮，同时根系健壮不易折，有助于快速恢复培养。

主权项：1.一种灰毡毛忍冬组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：S1外植体的清洁与消毒：选择含腋芽茎段为外植体，清洗，消毒，得消毒的外植体；S2诱导培养：取消毒的外植体，剪去伤口处，接种至初代培养基中，进行诱导培养，所述初代培养基为MS+NAA0.1~0.3mgL+6-BA0.5~1.5mgL+蔗糖20~40gL+琼脂6~8gL；S3继代增殖培养：将诱导的丛生芽，剪去上部叶片，并无菌切成单芽，接种至继代增殖培养基中，进行继代增殖培养，所述继代增殖培养基为：12MS+6-BA0.5~1mgL+生物素D0.3~0.7mgL+蔗糖20~40gL+琼脂6~8gL；S4过渡培养：将继代增殖的丛生芽，无菌切成单芽，接种至过渡培养基中，进行过渡培养，所述过渡培养包括依次加入过渡培养基1和过渡培养基2进行培养，所述过渡培养基1为：改良MS+苹果汁50~80mgL+CPPU0.01~0.02mgL+蔗糖20~40gL+琼脂6~8gL，或改良MS+苹果汁50~80mgL+CPPU0.01~0.02mgL+蔗糖20~40gL；所述过渡培养基2为：改良MS+苹果汁100~150mgL+CPPU0.01~0.03mgL+IBA0.05~0.1mgL+蔗糖20~40gL+琼脂6~8gL，或改良MS+苹果汁100~150mgL+CPPU0.01~0.03mgL+IBA0.05~0.1mgL+蔗糖20~40gL；所述改良MS的基础培养基成分如下：大量元素：硝酸钾KNO3：950mgL；硝酸铵NH4NO3：825mgL；磷酸二氢钾KH2PO4：85mgL；硫酸镁MgSO4·7H2O：185mgL；氯化钙CaCl2·2H2O：220mgL；微量元素：硫酸锰MnSO4·4H2O：22.3mgL；硫酸锌ZnSO4·7H2O：8.6mgL；钼酸钠Na2MoO4·2H2O：0.25mgL；硫酸铜CuSO4·5H2O：0.025mgL；氯化钴CoCl2·6H2O：0.025mgL；碘化钾KI：0.83mgL；硼酸H3BO3：6.2mgL；铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA：18.65mgL；硫酸亚铁FeSO4·7H2O：13.9mgL；维生素和氨基酸：甘氨酸：2mgL；盐酸硫胺素VB1：0.1mgL；盐酸吡哆醇VB6：0.5mgL；烟酸VB5：0.5mgL；其他：肌醇：100mgL；S5生根培养：将过渡培养得到的组培苗，接种至生根培养基中，诱导培养至生根形成，所述生根培养基为：改良MS+苹果汁150~200mgL+NAA1.0~2.0mgL+蔗糖20~40gL+活性炭0.1~0.4gL+琼脂6~8gL。

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