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申请/专利权人：中山大学肿瘤防治中心(中山大学附属肿瘤医院、中山大学肿瘤研究所)

摘要：本发明提供了一种半自动密闭化制备肿瘤特异性T细胞制剂的方法，属于细胞培养技术领域。包括以下步骤：利用外周血单采机分离血细胞置于储液袋中，然后将装有血细胞的储液袋连接到一次性细胞处理套件样品袋管路上；准备相应试剂连接无菌接管机的一次性转液管，在自动补液机的驱动下分别转入一次性细胞处理套件上配套的储液袋中，将其与PBMC分离机连接，对血细胞进行自动化分离、洗涤、浓缩、收集、磁珠孵育以及自动化分选等步骤，得到CD14+细胞和CD14‑细胞后进行DC‑T细胞培养，得到肿瘤特异性T细胞制剂。本发明可在非GMP环境下完成PBMC分离和DC‑T细胞培养过程，保证了培养过程的安全性，提高了产能、减少人力成本。

主权项：1.一种半自动密闭化制备肿瘤特异性T细胞制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：1利用外周血单采机分离血细胞，并收集于采集套件上的储液袋中，然后利用无菌接管机将装有血细胞的储液袋连接到一次性细胞处理套件上的样品袋管路上，使其与PBMC分离机连通；2准备培养基、分离液、洗涤液连接无菌接管机的一次性转液管，在自动补液机的驱动下分别转入一次性细胞处理套件上配套的储液袋中，并将一次性细胞处理套件上配套的储液袋与PBMC分离机上的凹槽连接，打开PBMC分离机对步骤1的血细胞进行自动化分离、洗涤、浓缩和收集，得到含有PBMC的储液袋；3准备CD14磁珠重悬液连接无菌接管机的一次性转液管，在自动补液机的驱动下转入一次性细胞处理套件上配套的储液袋，然后与PBMC分离机上的凹槽连接，打开PBMC分离机将CD14磁珠重悬液与步骤2收集的PBMC导入PBMC分离机的离心杯中，进行磁珠孵育，得到含有CD14磁珠孵育好的PBMC的储液袋；4准备培养基和MACSBuffer，与含有CD14磁珠孵育好的PBMC的储液袋分别连接无菌接管机的一次性转液管，在自动补液机的驱动下分别转入一次性细胞处理套件上配套的储液袋，并将一次性细胞处理套件上配套的储液袋与PBMC分离机上的凹槽连接，打开PBMC分离机进行自动化分选、洗涤和收集，得到CD14+细胞和CD14-细胞；5利用步骤4得到的CD14+细胞培养得到DC细胞，利用CD14-细胞培养得到CIK细胞；6将步骤5得到的DC细胞和CIK细胞混合共培养，纯化，即可得到肿瘤特异性T细胞制剂。

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权利要求：

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