买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：中国科学院上海药物研究所;中国人民解放军海军军医大学第三附属医院

摘要：本发明涉及一种检测组织中马兜铃酸I‑DNA加合物的方法。具体地，所述方法包括下述步骤：预处理，包括将所述组织样品依次经过组织消化；DNA纯化；酶孵育裂解；和加入含有马兜铃酸II内标的沉淀剂沉淀蛋白，取上清液为待测样品；液相色谱，将所述待测样品进行液相色谱分离；质谱，采用电喷雾电离源离子源，正离子多反应监测扫描。本发明的检测方法选择性强、方法可靠、检测快速，可用于马兜铃酸I‑DNA加合物的痕量检测。

主权项：1.一种内标法检测组织样品中马兜铃酸I-DNA加合物dA-ALI的液相色谱-串联质谱方法，其特征在于，包括下述步骤：i预处理，包括将所述组织样品依次经过下述步骤i-1-i-4：i-1组织消化；i-2DNA纯化；i-3酶孵育裂解；和i-4加入含有马兜铃酸IIAAII内标的沉淀剂沉淀蛋白，取上清液为待测样品；ii液相色谱，将所述待测样品进行液相色谱分离，采用ACEC18色谱柱50×2.1mm,5μm，梯度洗脱，流动相A为0.2％乙酸水溶液，流动相B为乙腈；以及iii质谱，采用电喷雾电离源ESI+离子源，正离子多反应监测扫描MRM；其中，dA-ALI的反应监测离子对为mz543.2→mz427.2和或mz543.2→mz395.2；内标AAII反应监测离子对为mz312.2→mz268.0；步骤i具有一个或多个选自下组的特征：a所述组织消化为酶解消化；b所述DNA纯化为使用GenomicDNAWash1与GenomicDNAWash2、和核酸纯化柱纯化DNA；c所述酶孵育裂解为使用DNaseI、NucleaseP1、碱性磷酸酶和磷酸二酯酶I进行孵育；d所述沉淀剂选自下组：乙醇、甲醇、乙腈，或其组合；e所述沉淀剂与酶孵育裂解后的样品以体积比1:1-4混合；和f所述含有马兜铃酸IIAAII内标的沉淀剂中，内标浓度为0.2-5μgmL；步骤ii中，液相色谱条件具有以下的特征：a液相色谱仪为UHPLC；b进样器温度为4-15℃；c柱温为30-40℃；d流速为0.2-0.6mLmin；和e所述梯度洗脱的程序为： 步骤iii中，所述质谱的条件具有选自下组的特征：a当dA-ALI离子对为mz543.2→mz427.2时，质谱条件包括DP55V，CE65eV；b当dA-ALI离子对为mz543.2→mz395.2时，质谱条件包括DP55V，CE65eV；和c对于AAII离子对为mz312.2→mz268.0时，质谱条件包括DP80V，CE11eV。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国科学院上海药物研究所 中国人民解放军海军军医大学第三附属医院 一种检测组织中马兜铃酸I-DNA加合物的方法