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一种牛初乳外泌体的提取方法 

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申请/专利权人:石河子大学

摘要:本发明涉及一种牛初乳外泌体的提取方法。传统的牛初乳外泌体提取方法存在操作复杂、提取效率低等问题,初乳随着泌乳时间的推移,其中的生物大分子,例如初乳中酪蛋白会逐渐减少。本发明的目的是提供一种简单、高效,通过加入凝乳酶以提取牛初乳外泌体的方法。本发明的提取方法包括以下步骤:(1)将采集到的牛初乳样品初步离心分离,得到上清液(2)往上清液加入一定量活化后的凝乳酶(3)将混合液放入水浴锅进行凝乳(4)凝乳结束后,进行离心操作,收集乳清(5)将收集到的乳清再次进行离心,收集上清液并初次过滤。(6)将初次过滤后的上清液进行高速离心,收集上清液进行二次过滤。(7)将二次过滤的上清液进行超速离心,富集外泌体沉淀。本发明将凝乳酶沉淀与过滤法相结合,操作简单、提取效率高,解决了牛初乳外泌体使用传统差速超速离心法难以完全去除牛初乳中大量酪蛋白以及细胞碎片的难题,能够快速获得高纯度的牛初乳外泌体提取物,可满足后续多种试验需求。

主权项:1.一种牛初乳外泌体的提取方法,其特征在于,包括牛初乳样本的采集与保存和牛初乳外泌体提取,具体包括以下步骤:A牛初乳样品采集与保存收集初乳样品,将收集到的初乳样品进行两次4℃,5000×g,离心30min,收集中间层,B牛初乳外泌体提取配置凝乳酶溶液,称取适量凝乳酶溶于1%盐溶液中,并置于水浴锅中活化30min;向步骤1中的牛初乳中加入步骤2中活化过后的凝乳酶溶液,并置于水浴锅中凝乳25-30min;凝乳结束后,4℃,12000×g,离心30min,收集上清液;将步骤4中上清液4℃,12000×g,离心1h,收集上清液,使用滤器初次过滤,收集滤过液;将步骤5中的滤过液4℃,30000×g,离心1h,收集上清液,使用滤器再次过滤,收集滤过液;将步骤6中的滤过液4℃,120000×g,离心1.5h,富集外泌体沉淀。

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