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申请/专利权人：宁波海尔施智造有限公司

摘要：本发明属于试剂盒技术领域，涉及一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒，包括和肽素抗体包被磁性颗粒试剂、和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂和生物素偶联的碱性磷酸酶试剂。本发明提供的试剂盒灵敏度高、稳定性好，可用于中风、心力衰竭以及心肌梗死的快速检测，为临床提供了更快的诊断技术。

主权项：1.一种磁微粒化学发光法测定和肽素的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：和肽素抗体包被磁性颗粒试剂、和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂和生物素偶联的碱性磷酸酶试剂；和肽素抗体偶联链霉亲和素试剂的制备方法，包括以下步骤：偶联剂处理链霉亲和素：在链霉亲和素中加入pH7.2~7.4、0.08~0.12molL硼酸缓冲液溶解成1~5mgml形成链霉亲和素溶液；将偶联剂溶解于二甲基亚砜中，形成1~5mgml溶液，偶联剂为二环己基碳二亚胺、N,N'-二异丙基碳二亚胺或SMCC，按照链霉亲和素与偶联剂的质量比1：（2~4），加入到链霉亲和素溶液中，在室温下下反应30~60min，离心，然后加入0.08~0.12MpH为6-8磷酸缓冲液使得偶联剂处理的链霉亲和素浓度为0.5~1.5mgml；还原剂处理和肽素抗体：取和肽素抗体，使用pH为7.0~7.5、20~50mmolL磷酸缓冲液替换和肽素抗体自带的缓冲液，然后加入0.03~0.06mmolL的还原剂，10ml还原剂对应加入0.9~1.1mg和肽素抗体，其中还原剂为二硫苏糖醇或β-巯基乙醇，在室温下孵育20~40min得经还原剂处理的和肽素抗体，离心，然后加入0.08~0.12MpH为6-8磷酸缓冲液使得还原剂处理和肽素抗体浓度为2~5mgml；偶联剂处理的链霉亲和素与还原剂处理和肽素抗体按质量比1：（1~10）混合，在室温下反应40~50min；反应后加入0.1~0.3ml3~8mM终止剂溶液终止反应时间20~40min，终止剂为连四硫酸钠，获得偶联产物，偶联产物纯化后，加入pH值6~9、含有0.1~0.5molLTris、2-6%BSA、0.1~0.3molL氯化镁、0.1~0.3molL氯化锌、0.1~0.3%Proclin300的工作液稀释成浓度为0.1~3μgml的工作液；生物素偶联的碱性磷酸酶试剂的制备方法，包括以下步骤：将生物素加入碱性磷酸酶中，混合均匀后静置室温下反应50~70min，获得生物素偶联的碱性磷酸酶，纯化后，加入含保护剂的保护液备用，最后加入发光标记物稀释液稀释浓度为0.2~1μgml；发光标记物稀释液包括：100mMHEPES缓冲液、3%BSA、0.1molL氯化镁、0.1molL氯化钙、0.1molL氯化锌、0.13molL氯化钠、2%蔗糖、3%海藻糖、10%甘油、1%聚乙二醇20000、0.5%聚乙二醇辛基苯醚、0.1%Proclin300、0.1%苯甲基磺酰氟，pH为7.4。

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