申请/专利权人：南昌大学

申请日：2020-12-04

公开（公告）日：2024-07-05

公开（公告）号：CN112430653B

主分类号：C12Q1/686

分类号：C12Q1/686;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.07.05#授权;2021.03.19#实质审查的生效;2021.03.02#公开

摘要：本发明涉及PCR步移技术领域，具体涉及一种用于基因组步移的差异退火介导的茎环PCR技术。本发明利用长度与退火温度适中的引物介导茎环形成，构成特异性扩增目标分子的结构基础,这些茎环形成引物还具有如下特点：或与已知序列一致，或额外在其3’端引入1‑3个自由碱基。上述特点确保在有限的已知区域设计多条引物用于平行反应,利用高退火温度的特异性引物和退火温度适中的茎环形成引物进行第一轮PCR，用于介导茎环形成；第二轮使用一对特异性引物：茎引物和环引物对目标分子进行指数富集，非特异性分子因为没有茎特异性引物或者环特异性引物的结合位点而被消除。

主权项：1.一种用于基因组步移的步移引物的差异退火介导的茎环PCR方法，其特征在于：所述差异退火介导的茎环PCR方法用于非诊断目的，包括以下步骤：第一轮PCR反应:①94℃变性2min；②5个高严谨，60℃循环，94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸2min；③一个低严谨循环：94℃变性30s，25℃退火30s，72℃延伸2min；④15个适中温度退火循环：94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸2min；⑤25个高严谨循环：94℃变性30s，65℃退火30s，72℃延伸2min；⑥72℃延伸10min；第二轮PCR反应:①94℃变性2min；②35个高严谨循环：94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸2min；③72℃延伸10min；所述基因组步移反应的引物分别为SP、SLFP、StP、LoP，引物根据已知序列进行设计，设计的引物对基因的未知侧翼进行获取，引物SP和引物SLFP用于第一轮PCR，用于介导茎环形成，引物StP和引物LoP用于第二轮PCR，对目标分子进行指数富集；所述引物SP的序列如序列表中SEQIDNO:1～SEQIDNO:3所示，引物SLFP的序列如序列表中SEQIDNO:4～SEQIDNO:15所示，引物StP的序列如序列表中SEQIDNO:16～SEQIDNO:18所示，引物LoP的序列如序列表中SEQIDNO:19～SEQIDNO:21所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南昌大学 一种用于基因组步移的差异退火介导的茎环PCR技术

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