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申请/专利权人：深圳市华大农业应用研究院;深圳华优益生物技术有限公司
摘要：本发明属于基因编辑领域，具体涉及一种单碱基编辑ALS和ACC基因的玉米种质的创制方法。本发明利用nCas9融合deaminase和UGI及nCas9融合TadA构建得到玉米胞嘧啶和腺嘌呤碱基编辑器。构建靶向ZmALS或ZmACC活性位点的胞嘧啶碱基编辑载体，农杆菌侵染法转化磺酰脲类除草剂敏感的骨干自交系茎尖或幼胚，得到无转基因的纯合单碱基编辑阳性植株。并通过对T1代单碱基编辑阳性植株进行除草剂处理实验，证实与野生型B104相比，单碱基突变使得自交系玉米材料具有较强的除草剂耐性，降低了其对磺酰脲类（SU）除草剂的敏感性，对玉米耐除草剂新品种的选育提供了可行性依据。
主权项：1.一种单碱基编辑ALS和ACC基因的玉米种质的创制方法，其特征在于，所述创制方法包括如下步骤：（一）对ALS与ACC基因sgRNA靶序列进行选择：首先对ALS1ALS2基因的sgRNA靶序列选择；然后对ACC1ACC2基因的sgRNA靶序列进行选择；（二）构建ACC1ACC2双基因以及ALS1ALS2ACCAACC2四基因的sgRNA表达载体：首先对靶序列寡核苷酸进行合成，其次构建双子叶植物CBE终载体pCambia1300ATUBQ::rAPOBEC1-nCas9-UGI，然后构建单子叶植物适用的pCambia1300ZmUbi::nCas9-PmCDA1-UGI载体，最后构建ACC-CBE及ACCALS-CBE单碱基编辑载体；（三）单碱基编辑载体及GFP阳性对照转化原生质体进行效率检测；（四）农杆菌介导的玉米幼胚转化法：首先进行外植体制备，然后进行农杆菌介导的玉米幼胚遗传转化，即可得到玉米种质。
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百度查询： 深圳市华大农业应用研究院 深圳华优益生物技术有限公司 一种单碱基编辑ALS和ACC基因的玉米种质的创制方法
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