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申请/专利权人：嘉必优生物技术(武汉)股份有限公司
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种纯化蛛丝蛋白包涵体的方法。所述方法，包括：步骤1，将湿菌体破壁后，分离得到含有蛛丝蛋白包涵体的沉淀I；步骤2，将所述沉淀I与含有尿素的缓冲液混合，并分离得到含有蛛丝蛋白包涵体的沉淀II；其中，所述含有尿素的缓冲液中，尿素的体积摩尔浓度为1～3M。本发明直接采用离心的方法纯化蛛丝蛋白包涵体，操作简单，简化了蛋白纯化和复性步骤，可得到较纯的蛛丝蛋白包涵体；同时，节约了时间，降低了成本，可应用于工业生产。
主权项：1.一种纯化蛛丝蛋白包涵体的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）使用含有蛋白酶抑制剂的缓冲液对重组大肠杆菌湿菌体进行破壁后，在5000~7000rmin下离心14min以上，分离得到含有蛛丝蛋白包涵体的沉淀I；其中，所述蛋白酶抑制剂选自PMSF、TLCK、TPCK、亮肽素、AEBSF、焦磷酸钠、β磷酸甘油中的一种或几种；所述蛋白酶抑制剂的体积摩尔浓度为0.5~2M；所述缓冲液的pH值为8.0；（2）将所述沉淀I与含有尿素的缓冲液混合，在8000~12000rmin下离心14min以上，分离得到的沉淀重复步骤（2）1~3次，得含有蛛丝蛋白包涵体的沉淀II；（3）将所述沉淀II再次与含有尿素的缓冲液混合，先在800~1200rmin下离心1~3min，分离得到的上清液再在8000~12000rmin下离心18min以上，所得沉淀即为纯化后的蛛丝蛋白包涵体；其中，所述尿素的体积摩尔浓度为1~3M；所述缓冲液的pH值为8.0。
全文数据：
权利要求：
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