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申请/专利权人：恒敬合创生物医药(浙江)有限公司
申请日：2024-04-24
公开（公告）日：2024-07-05
公开（公告）号：CN118291598A
主分类号：C12Q1/686
分类号：C12Q1/686;C12Q1/6876;C12Q1/6806;C12Q1/34;C12N9/16;C12N15/70;C12N15/11;C12R1/19
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.07.23#实质审查的生效;2024.07.05#公开
摘要：本公开提供了一种高通量筛选包涵体形式表达的突变体蛋白的方法。该方法包括：通过易错PCR技术扩增来源于真核生物蛋白的活性结构域基因，得到扩增产物；将扩增产物与载体连接，得到连接产物；将连接产物转化至大肠杆菌感受态细胞中，得到突变体文库；在细胞培养微板中对突变体文库中的阳性转化子进行培养和诱导，得到诱导后的阳性转化子；将诱导后的阳性转化子进行原位裂解，得到包涵体；向包涵体中加入变性缓冲液，震荡后，加入复性缓冲液，于冰上缓慢摇晃后，再静置于低温环境中，得到复性产物蛋白；对所述复性产物进行活性检测和筛选，得到所述突变体蛋白。本公开提供的方法可高通量筛选获得酶活性显著提高的突变体蛋白。
主权项：1.一种高通量筛选包涵体形式表达的突变体蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括：通过易错PCR技术扩增来源于真核生物蛋白的活性结构域基因，得到扩增产物；将所述扩增产物与载体连接，得到连接产物；将所述连接产物转化至大肠杆菌感受态细胞中，得到突变体文库；在细胞培养微板中对所述突变体文库中的阳性转化子进行培养和诱导，得到诱导后的阳性转化子；将所述诱导后的阳性转化子进行原位裂解，得到包涵体；对所述包涵体进行原位变复性，即向所述包涵体中加入变性缓冲液，震荡后，加入复性缓冲液，于冰上缓慢摇晃后，再静置于低温环境中，得到复性产物，所述变性缓冲液为巯基乙酸钠溶液，所述复性缓冲液包括：Tris和甘油；对所述复性产物进行活性检测和筛选，得到所述突变体蛋白。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 恒敬合创生物医药(浙江)有限公司 一种高通量筛选包涵体形式表达的突变体蛋白的方法
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