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申请/专利权人：东北农业大学
摘要：本发明公开了一种基于级联链置换反应检测E.coliO157:H7的方法，属于生物技术领域。本发明解决了现有技术中通过组合不同的放大方法获得的级联扩增法成本较高，需要繁琐的多步骤操作的问题。所述基于级联链置换反应检测E.coliO157:H7的方法采用适配体功能化磁珠来识别E.coliO157:H7，从而使得与适体互补的DNA掉落并触发三重级联链置换扩增以形成大量的G‑四链体，最后利用硫磺素T在插入G‑四链体后能够产生显著的荧光增强来实现荧光信号的输出完成检测。本发明提供的检测E.coliO157:H7的方法实现了简单、快速、灵敏、低成本地对E.coliO157:H7进行定性与定量检测，检出限低，可用于检测复杂食品基质中的E.coliO157:H7污染，尤其是乳制品中的E.coliO157:H7污染。
主权项：1.一种基于级联链置换反应检测E.coliO157:H7的方法，其特征在于，所述检测方法如下：S1、在链霉亲和素磁珠SMBs上连接生物素修饰的E.coliO157:H7的适配体Apt，得到SMBs-Apt；S2、取待检测物质，离心后弃去上清液，得到沉淀，并用NEBuffer2缓冲液重悬，得到沉淀悬液；S3、在离心管中，添加SMBs-Apt、Apt互补链cDNA和沉淀悬液，进行反应；S4、磁分离得到含有cDNA的上清液，并转移上清液至另一离心管中；S5、向含有上清液的离心管中加入发夹链HP、NEBuffer2缓冲液、引物链Prime、模板链Template、硫磺素T、脱氧核苷酸5'-三磷酸酯混合物dNTPs、Nb.BbvCI核酸内切酶、Klenow片段聚合酶KF，进行反应；S6、反应完成后，检测荧光强度变化，并根据荧光强度变化程度判定所述待检测物质中是否含有E.coliO157:H7。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 东北农业大学 一种基于级联链置换反应检测E. coli O157:H7的方法
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