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申请/专利权人：广西大学

摘要：本发明公开了一种基于Fe‑N5HCS—β‑gal级联催化比色检测E.coli的方法，利用Fe‑N5单原子纳米酶在酸性条件下催化氧化TMB生成TMB2+作为AuNRs的刻蚀剂，接着将含有E.coli的溶液与PAPG缓冲溶液混合得到含有PAP的溶液后，与刻蚀剂混合均匀加入至AuNRs溶液中对AuNRs进行刻蚀，使AuNRs的长径比发生变化致使溶液的颜色变化并以此对E.coli进行定性和半定量检测。其原理主要是：PAPG被E.coli中的特有β‑gal酶水解生产PAP，PAP可还原并抑制TMB2+的生成，从而影响AuNPs的刻蚀程度，进而使AuNPs溶液产生颜色变化，通过溶液颜色变化快速检测是否含有E.coli以及评估E.coli的菌落数，本发明不仅检测快速灵敏，还可以解决现有纳米酶比色检测方法中存在的耗时长和稳定性差的问题。

主权项：1.一种基于Fe-N5HCS—β-gal级联催化比色检测E.coli的方法，用于非疾病诊断和治疗的目的，其特征在于：包括以下步骤：（1）Fe-N5HCS单原子纳米酶的制备：取纳米碳酸钙微球加入至多巴胺乙醇溶液中进行自组装包覆12～24h后，置于氮气氛围的管式炉中，升温至700～900℃后煅烧0.5～4h，然后自然冷却至室温，再用稀盐酸浸洗去除碳酸钙，制备得到N-HCS，接着将N-HCS和1,3,6-三硝基芘加入氨水溶液中，然后转入水热反应釜中反应1～4h,得到N-HCS@GQD-NH2，接着将N-HCS@GQD-NH2与含FeCl3·6H2O的溶液均匀混合后再干燥，然后置于管式炉中煅烧得到具有过氧化物酶活性的Fe-N5HCS单原子纳米酶；（2）酶级联多色比色检测E.coli：取步骤（1）中得到的Fe-N5HCS单原子纳米酶与饱和TMB溶液、H2O2溶液混合反应5～10min后加入H2SO4溶液反应得到含有氧化态TMB2+的溶液A；取经过超声破碎的不同菌落数的E.coli分别与等量的PAPG缓冲溶液混合反应，得到不同PAP含量的系列溶液B，向系列溶液B中分别加入等量的溶液A混合均匀后，再与等量的AuNPs溶液混合进行刻蚀反应10min得到系列溶液C，然后在500～750nm波长范围内采集系列溶液C的可见光光谱信号及颜色变化图片；（3）实际样本中大肠杆菌检测：取1mL试样置于10mL离心管中，加入5mLNaAC-HAC缓冲溶液，涡旋混合1min，超声破碎1～5min，弃去底部沉淀，收集得到样本待测液；取100μL样本待测液加入40μL的PAPG缓冲溶液，孵育10min生成含有PAP的溶液D，取步骤（2）中得到的溶液A和所述的溶液D混合后加入AuNPs溶液中刻蚀反应10min，在500～750nm波长范围内采集可见光的光谱信号或颜色变化图片，并通过溶液颜色变化快速检测试样中是否含有E.coli以及评估体系中E.coli的菌落数范围。

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权利要求：

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