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申请/专利权人:中国农业科学院特产研究所
摘要:本发明公开了一种牛病毒性腹泻病毒Erns‑E2亚单位疫苗及其制备方法,属于动物疫苗与兽用生物制品技术领域。本发明解决了BVDV亚单位疫苗研发过程中原核表达蛋白产物多以包涵体形式表达,不方便蛋白纯化,缺乏糖基化修饰,影响蛋白免疫原性的问题。所述疫苗的制备方法为对Erns蛋白和E2蛋白的核苷酸序列进行优化;将信号肽序列和优化后的Erns蛋白的核苷酸序列克隆到载体中;将信号肽序列和E2蛋白的核苷酸序列克隆到载体中;将两种重组质粒分别转染至细胞中培养,收集细胞培养上清并纯化,得到Erns蛋白和E2蛋白;将两种蛋白按比例混合并加入疫苗佐剂获得牛病毒性腹泻病毒Erns‑E2亚单位疫苗。本发明所述的牛病毒性腹泻病毒Erns‑E2亚单位疫苗适用于牛病毒性腹泻病毒的预防。
主权项:1.一种牛病毒性腹泻病毒Erns-E2亚单位疫苗的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括如下步骤:步骤1.对牛病毒性腹泻病毒Erns蛋白核苷酸序列进行优化,优化后的牛病毒性腹泻病毒Erns蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示;对牛病毒性腹泻病毒E2蛋白核苷酸序列进行优化,优化后的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示;步骤2.将信号肽序列和优化后的牛病毒性腹泻病毒Erns蛋白的核苷酸序列克隆到真核表达载体中得到含有牛病毒性腹泻病毒Erns蛋白重组质粒;将信号肽序列和优化后的牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的核苷酸序列克隆到真核表达载体中得到含有牛病毒性腹泻病毒E2蛋白重组质粒;步骤3.将两种重组质粒分别转染至悬浮培养的CHO-S细胞中悬浮培养,收集细胞培养上清,然后将细胞培养上清纯化分别得到牛病毒性腹泻病毒Erns蛋白和E2蛋白;步骤4.将Erns蛋白和E2蛋白按照质量比进行混合,然后加入疫苗佐剂获得牛病毒性腹泻病毒Erns-E2亚单位疫苗。
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百度查询: 中国农业科学院特产研究所 一种牛病毒性腹泻病毒Erns-E2亚单位疫苗及其制备方法
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