申请/专利权人：国家烟草质量监督检验中心;中国科学院合肥物质科学研究院

申请日：2022-07-29

公开（公告）日：2023-12-22

公开（公告）号：CN115266985B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.12.22#授权;2022.11.18#实质审查的生效;2022.11.01#公开

摘要：本发明公开了一种基于UHPLC‑QTOF‑MS的喉癌患者血清脂质组学检测方法，该方法包括以下步骤：1取样，采集志愿者血清；212种脂质标准品分析方法的建立；3血清样品前处理及非靶向脂质组学检测；4差异脂质的鉴定及统计学分析。本发明通过12种脂质标准品为探针以优化分析方法并利用该方法完成了喉癌患者血清中的脂质检测，从脂质组学的角度阐明了喉癌脂质代谢通路网络变化，筛选到了关键差异代谢物，为喉癌候选生物标志提供了新的可能。

主权项：1.一种基于UHPLC-QTOF-MS的喉癌患者血清脂质组学检测方法，其特征在于：包括以下具体过程：步骤一：取样，获取志愿者血清：招募喉癌患者、喉良性肿瘤患者和健康人群，对志愿者进行筛选，采集所有受试者的空腹血液；将新鲜血液经预处理离心得到血清，分离与分装过程在冰上进行，所有样品通过液氮速冻后于超低温冰箱﹣80℃保存；步骤二：针对12种脂质标准品建立分析方法：将12种脂质标准品作为探针进行高效液相色谱-三重四级杆质谱LC-MS分析方法优化，并完成方法学考察；12种脂质标准品作为探针进行LC-MS分析方法优化的具体步骤如下：（1）质控QC样本前处理：QC样本是挑选喉癌患者、喉良性肿瘤患者和健康人群三类受试者各5例样品，每例样品吸取100μL进行混合，分别按照加标样品前处理流程和不加标前处理流程进行处理；（2）配制12种脂质标准品I级储备液、混合脂质标准储备液、混合内标溶液、12种脂质标准品II级储备液与标曲工作液；（3）利用脂质标准品溶液进行色谱柱类型、柱温、流速和流动相梯度条件优化以及质谱条件优化；（4）LC-MS测定加标QC样品和不加标QC样品，完成检出限、定量限、线性范围、精密度、准确度和回收率的方法学考察；步骤三：血清样品前处理及非靶向脂质组学检测：对不同组别的所有入选志愿者血清进行样品前处理，并通过步骤二已建立的分析方法，用高效液相色谱-飞行时间质谱UHPLC-QTOF-MS平台进行更为广泛的非靶向血清脂质组学检测；步骤四：差异脂质的鉴定及统计学分析：进行多变量分析：建立主成分分析PCA分析模型，观察样本和质控样本的分布；建立正交偏最小二乘法判别分析OPLS-DA模型，通过置换分析观察模型的拟合程度，并筛选出变量重要性投影VIP＞1的变量；对样本中的代谢物的显著性进行单变量分析，结合多变量分析结果筛选出VIP1，P0.05的变量；对可能的差异脂质完成定性、注释和生物学意义分析。

全文数据：

权利要求：

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