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申请/专利权人：复旦大学附属儿科医院
摘要：本发明涉及一种利用数字PCR技术定量检测KPC耐药基因的检测方法及试剂盒，包括备用、反应体系配置、微滴制备、扩增、芯片阅读，其中DNA模板的序列、引物对的序列、探针的序列如SEQIDNO1～SEQIDNO4所示。属于生物技术领域。数字PCR系统可将PCR反应体系均匀分割成数万个反应微滴，每个微滴平行、独立完成PCR扩增，进一步提高了实验的敏感性和特异性。
主权项：1.一种利用数字PCR技术定量检测KPC耐药基因的检测方法，包括以下步骤：步骤1：先将10xPCRBuffer含Rox、引物对、探针和DNA模板充分融化，充分混匀，然后使用离心机离心至管底，放在冰上备用；步骤2：反应体系配置，其中，10×浓度的PCRBuffer2uL，正向引物F，10uM1uL，反向引物R，10uM1uL，探针P，5uM1uL，H2013uL，DNA模板2uL，混合均匀；步骤3：微滴制备，使用PCR系统中的全自动上样仪将20ulPCR反应液均匀分散至芯片中；步骤4：扩增，将芯片放置于扩增仪中，按该程序进行扩增，先在95℃温度下预变性5min；然后进行45个循环，其中每个循环依次进行95℃，30s和56℃，45s；步骤5：芯片阅读，将扩增后的芯片放置于芯片阅读仪中，进行芯片阅读分析；其中，DNA模板的序列如SEQIDNO1所示；引物对的序列如SEQIDNO2、SEQIDNO3所示；探针的序列如SEQIDNO4所示。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 复旦大学附属儿科医院 一种数字PCR检测KPC耐药基因的方法及试剂盒
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