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申请/专利权人：安徽医科大学

摘要：一种基于PfAgo核酸酶的产碳青霉烯酶肠杆菌科五种耐药基因的单通道快速检测方法及试剂盒，包括核酸提取得到待检核酸；以五组不同的PCR引物分别对五种耐药基因待检测位点进行扩增并得到核酸产物，分别是KPC型基因扩增产物、NDM型基因扩增产物、IMP型基因扩增产物、VIM型基因扩增产物和OXA‑48型基因扩增产物；配置PfAgo反应混合液，10μL核酸扩增产物加入到PfAgo反应混合液，95℃孵育30分钟，通过读取荧光获得检测结果。本发明利用来源于激烈火球菌的PfAgo进行检测，具有检测速度快、准确度高、成本较低的优点。

主权项：1.一种基于PfAgo核酸酶的产碳青霉烯酶肠杆菌科五种耐药基因的单通道快速检测方法的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：五组PCR扩增引物：KPC-for：5’-GCCGTGCAATACAGTGATAAC-3’；KPC-rev：5’-TAGAGCGCATGAAGGCCGTCA-3’；NDM-for：5’-CACGCGCATCAGGACAAGATG-3’；NDM-rev：5’-GTCAGGCTGTGTTGCGCCGCA-3’；IMP-for：5’-GCTTGATGAAGGCGTTTATGTTC-3’；IMP-rev：5’-GTTTAGGAACAACGCCCCACC-3’；VIM-for：5’-TCGCAACGCAGTCGTTTGATG-3’；VIM-rev：5’-TTCGCACCCCACGCTGTATC-3’；OXA-48-for：5’-CTGAACATAAATCACAGGGCG-3’；OXA-48-rev：5’-GCCCGTTTAAGATTATTGGT-3’；五组PfAgo核酸酶特异性检测的gDNA：KPC-gDNA1：5’-CCGCCGCCAATTTGTT-3’；KPC-gDNA2：5’-GCTGAAGGAGTTGGGC-3’；KPC-gDNA3：5’-GGCCGCCCAACTCCTT-3’；NDM-gDNA1：5’-ATTGCGACTTATGCCA-3’；NDM-gDNA2：5’-ATGCGTTGTCGAACCA-3’；NDM-gDNA3：5’-AAGCTGGTTCGACAAC-3’；IMP-gDNA1：5’-GTTTATGTTCATACTT-3’；IMP-gDNA2：5’-CGTTTGAAGAAGTTAA-3’；IMP-gDNA3：5’-CCCGTTAACTTCTTCA-3’；VIM-gDNA1：5’-AATGGTCTCATTGTCC-3’；VIM-gDNA2：5’-GTGATGGTGATGAGTT-3’；VIM-gDNA3：5’-AAGCAACTCATCACCA-3’；OXA-48-gDNA1：5’-CGTAGTTGTGCTCTGG-3’；OXA-48-gDNA2：5’-AATGAGAATAAGCAGC-3’；OXA-48-gDNA3：5’-CCTTGCTGCTTATTCT-3’；DNA分子信标：KPC-MB：5’-FAM-cgcaccTTTGTTGCTGAAGGAGggtgcg-BHQ1-3’；NDM-MB：5’-FAM-cgcaccATGCCAATGCGTTGTCggtgcg-BHQ1-3’；IMP-MB：5’-FAM-cgcaccATACTTCGTTTGAAGAggtgcg-BHQ1-3’；VIM-MB：5’-FAM-cgcaccTTGTCCGTGATGGTGAggtgcg-BHQ1-3’；OXA-48-MB：5’-FAM-cgcaccCTCTGGAATGAGAATAggtgcg-BHQ1-3’。

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