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一种新型且高效经济的eccDNA合成方法及其在microRNA过表达中的应用 

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申请/专利权人:中山大学附属第七医院(深圳)

摘要:本发明提供了一种新型且高效经济的eccDNA合成方法及其在microRNA过表达中的应用,属于基于生物DNA序列的基因合成领域。本发明通过提取样本总DNA,纯化得到内源性eccDNA;内源性eccDNA与随机引物混合,进行变性退火,退火产物进行RCA反应;以RCA反应产物为模板,扩增获得两条半互补的目标线性片段A和线性片段B;将线性片段A和线性片段B混合,在含有TaqDNA连接酶的反应体系中,进行变性退火和连接反应,获得目标eccDNA。本发明所述方法节省了DNA合成费用,缩短了时间周期,可高保真地获得内源性eccDNA,更好地模拟内源性eccDNA的功能。

主权项:1.一种eccDNA合成方法,其特征在于,包括以下步骤:1提取样本总DNA,纯化得到内源性eccDNA;2内源性eccDNA与随机引物混合,进行变性退火,退火产物进行RCA反应;3以RCA反应产物为模板,扩增获得两条半互补的目标线性片段A和线性片段B;4将线性片段A和线性片段B混合,在含有TaqDNA连接酶的反应体系中,进行变性退火和连接反应,获得目标eccDNA。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 中山大学附属第七医院(深圳) 一种新型且高效经济的eccDNA合成方法及其在microRNA过表达中的应用

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