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申请/专利权人：江苏省淡水水产研究所
摘要：本发明公开了一种靶向敲除斑点叉尾鮰mstna基因的sgRNA序列及其筛选方法，通过设计CRISPR序列，制备包含目标基因的PCR扩增产物并将其与载体连接，再通过体外转录方法制备sgRNA，将所述sgRNA、所述包含目的基因的质粒和Cas9蛋白显微注射斑马鱼受精卵，以斑马鱼受精卵作为反应器筛选靶向敲除斑点叉尾鮰mstna基因的sgRNA序列。本发明首次以斑马鱼受精卵作为反应器筛选出编辑斑点叉尾鮰mstna基因的sgRNA序列，特异性强且敲除效率高，敲除流程简单快捷，为后续解析斑点叉尾鮰mstna基因功能提供动物材料。
主权项：1.一种靶向敲除斑点叉尾鮰mstna基因的sgRNA序列的筛选方法，其特征在于：包括，设计CRISPR序列，所述CRISPR序列如序列SEQNO.1～SEQNO.8所示；用所述CRISPR序列制备含目标基因片段的PCR扩增产物，制备目标基因的PCR扩增产物，所述目标基因片段如序列SEQNO.9所示；将所述含目标基因片段的PCR扩增产物与载体连接、转化后筛选阳性转化子，经克隆摇菌并抽提出包含目的基因的质粒；根据设计的CRISPR序列，用体外转录方法制备sgRNA；将所述sgRNA、所述包含目的基因的质粒和Cas9蛋白显微注射斑马鱼受精卵，以斑马鱼受精卵作为反应器筛选编辑斑点叉尾鮰mstna基因的sgRNA序列。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 江苏省淡水水产研究所 一种靶向敲除斑点叉尾鮰mstna基因的sgRNA序列及其筛选方法
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