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摘要：本发明提供一种人凝血因子VIIa的纯化方法，采用阴离子交换层析，阴离子交换层析，疏水层析三步纯化，以及灭活病毒和除病毒过滤步骤，制备获得纯度、活性及安全性满足药用要求的人凝血因子VIIa。
主权项：1.一种重组人凝血因子VIIa的纯化方法，包括依次进行的以下步骤：1阴离子交换层析，所述1阴离子交换层析包括a预平衡，b上样后平衡，和c洗脱，所述预平衡和上样后平衡采用的缓冲液为pH8.0-8.2的含50mmolL氯化钠的20mmolL水合磷酸氢二钠，所述洗脱采用的缓冲液为pH8.0-8.2的含500mmolL氯化钠的20mmolL水合磷酸氢二钠；2对步骤1所得产物进行SD病毒灭活；3采用阴离子交换层析进一步纯化步骤2所得产物，所述阴离子交换层析包括a预平衡，b上样后平衡，c淋洗，和d洗脱，所述预平衡和上样后平衡采用的缓冲液为pH8.0-8.2的含100mmolL氯化钠的10mmolL三羟甲基氨基甲烷，所述淋洗采用的缓冲液为pH8.0-8.2的含100mmolL氯化钠和2.25mmolL氯化钙的10mmolL三羟甲基氨基甲烷，所述洗脱采用的缓冲液为pH8.0-8.2的含100mmolL氯化钠和5mmolL氯化钙的10mmolL三羟甲基氨基甲烷；4采用疏水层析进一步纯化步骤3所得产物，所述疏水层析包括a用饱和乙酸铵调节阴离子交换层析洗脱液的电导至100mScm，b预平衡，c上样后平衡，和d洗脱，所述预平衡和上样后平衡采用的缓冲液为pH6.0的含1.8molL乙酸铵的10mmolL甘氨酰甘氨酸，所述洗脱采用的缓冲液为pH6.0的含30mmolL二水合柠檬酸三钠的10mmolL甘氨酰甘氨酸；5对步骤4所得产物进行除病毒过滤；6对步骤5所得产物进行超滤换液；7对步骤6所得产物进行除菌过滤获得原液；所述方法不包含亲和层析步骤。
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