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申请/专利权人:华芢生物科技(青岛)股份有限公司
摘要:本发明公开了一种毕赤酵母产PDGF‑BB的高密度发酵方法,所述方法对毕赤酵母产PDGF‑BB的发酵培养基进行了优化,并在甘油补加阶段使用了指数补料的方式,契合菌体生长的比生长速率,使菌体状态继续维持在高活性,同时使培养基中的甘油没有残留,发酵时间明显缩短,不仅显著增加了蛋白质产量,也使其生物活性获得显著提高。
主权项:1.一种毕赤酵母产PDGF-BB的高密度发酵方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:(1)菌体初始培养:将毕赤酵母种子液接入含有氯化钠的发酵培养基中,接种比例10~15vv%,接种OD600=10~20,初始培养条件为30~32℃,pH4.5~5.5,通气量0.5~1.5vvm,随着菌体的不断生长,通过增大转速和通气量,控制溶氧在40%以上,本步骤时间为18~22小时,当溶氧值快速回升至80%以上进入步骤(2);(2)补加甘油:步骤(1)结束后,补加50vv%左右的甘油溶液,补加速率为以9~11mlLh起始,并以指数补料的方式补加,培养过程中调整转速和通气量控制溶氧在30~60%,本步骤时间为3-5小时,当菌体OD600达到190-210时,菌体湿重在145~155gl时,停止补加甘油;(3)诱导:步骤(2)结束后,无需饥饿,降低培养温度至24~28℃,开始补加100%甲醇溶液进行诱导培养,诱导过程中调整转速和通气量控制溶氧在35~55%,诱导48h后结束发酵。
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