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申请/专利权人:浙江省农业科学院
摘要:本发明涉及鱼类受精卵孵化过程中的代谢物检测分析方法,尤其涉及一种三角鲂受精卵孵化不同发育时期代谢物的检测方法。该方法通过非靶向代谢组学方法对三角鲂孵化过程中的受精卵样品进行研究,分析三角鲂胚胎发育过程中主要差异代谢物种类、丰度及代谢通路,阐明差异代谢物影响三角鲂胚胎发育的调控机制,从而为三角鲂高效孵化技术设施及体系优化提供理论支持,也为三角鲂优良种质繁育及育种提供基础资料。
主权项:1.一种三角鲂受精卵孵化不同发育时期代谢物的检测方法,其特征在于,该方法包括以下的步骤:1)将人工催产的三角鲂受精卵放入培养皿中进行静水孵化,每3-5h挑死卵一次,并更换充氧曝气的水,在孵化发育不同时期取受精卵样品;2)选取同等数量的样品至离心管中,加入研磨珠;加入含内标的提取液,-20~-5℃冷冻组织研磨仪研磨,1-10℃低温超声提取;3)将样品静置于-25-15℃,20-40min;1-10℃低温,10000-15000g离心10-20min,移取上清液至带内插管的进样小瓶中上机分析;4)采用超高效液相色谱串联傅里叶变换质谱系统进行分析,获取总离子色谱图;5)原始数据导入代谢组学处理软件进行基线过滤、峰识别、积分、保留时间校正、峰对齐处理,得到含保留时间、质荷比和峰强度信息的数据矩阵;其后进行特征峰搜库鉴定,将MS和MSMS质谱信息与代谢数据库进行匹配,MS质量误差设置为小于10ppm,同时根据二级质谱匹配得分鉴定代谢物,使用差异代谢集进行代谢集分析,通过KEGG数据库对筛选出的差异代谢物进行注释、分类、聚类、富集分析和代谢通路整体变化分析。
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