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申请/专利权人：湖北省药品监督检验研究院

摘要：本发明公开了一种基于多重连接探针扩增技术对菟丝子、油菜籽、莱菔子进行鉴定的方法，它包括以下步骤：1提取样品基因组DNA；2以基因组DNA为模板，设计特异性引物扩增ITS2序列；3将扩增产物变性后与MLPA探针进行杂交；4将杂交产物进行连接；5利用通用引物对连接产物进行实时荧光定量PCR扩增；6收集熔解曲线信号，观测Tm值。本发明能够在较短的时间内鉴别菟丝子、油菜籽、莱菔子，可有效检测出掺混样品，该方法具有特异性强，灵敏度高等优点，在中药材真伪鉴定领域有很好的应用前景。

主权项：1.一种基于多重连接探针扩增技术对菟丝子、油菜籽、莱菔子进行鉴定的方法，其特征在于包括以下步骤：1）提取样品基因组DNA；2）以步骤1）的基因组DNA为模板，设计特异性引物扩增菟丝子、油菜籽、莱菔子的ITS2序列；3）将扩增产物变性后与MLPA探针进行杂交；4）利用DNA连接酶将步骤3）的杂交产物进行连接；5）利用通用引物对步骤4）的连接产物进行实时荧光定量PCR扩增；6）收集熔解曲线信号，观测Tm值，其中，所述MLPA探针共3组，每一组分别由左探针和右探针组成，各探针的序列如下：第一组菟丝子左探针：GGGTTCCCTAAGGGTTGGACGTCGCCGTGGTTGGCCGAAAGTATTGTCCGTGATTTT；右探针：GTTGATGTCTTGGCGTGCGGTGGATGGGGCGGGTCTAGATTGGATCTTGCTGGCAC；第二组莱菔子左探针：GGGTTCCCTAAGGGTTGGAGGGCGTCTTGACATGCGGTGGTGAATTCAATC；右探针：TCCTCGTCATATCGTCGCTCGTTCCGGTCCCCTCTAGATTGGATCTTGCTGGCAC；第三组油菜籽左探针：GGGTTCCCTAAGGGTTGGAGAGCGTCTTGACATGCGGTGGTGAATTTAATT；右探针：CTCGTCATATAGTCAGTCGTTCCGGTTCTAGATTGGATCTTGCTGGCAC；用于扩增所述菟丝子、油菜籽、莱菔子ITS2序列的特异性引物如下；上游引物:CTCTCGCATCGATGAAGAACG；下游引物:TTGATATGCTTAAACTCAGCGGG；所述通用引物如下：上游引物:GGGTTCCCTAAGGGTTGGA；下游引物:TCTAGATTGGATCTTGCTGGCAC。

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