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申请/专利权人：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

摘要：一种鲤鱼肝脏细胞系的构建及诱导成脂的方法，本发明涉及一种鱼类肝脏细胞系的构建及诱导成脂的方法。本发明方法：一、肝组织处理：鱼体消毒后清洗鱼体内的肝组织；二、消化肝脏组织；三、原代培养及传代；四、肝细胞诱导成脂。本发明通过胰酶初步消化与组织块贴块相结合的方法大大加快了细胞爬出速度，降低酶长时消化对细胞质量的影响，提高了细胞传代的能力，为鲤肝脏基础研究提供材料；本发明所使用的成脂诱导液可在6‑8天成功诱导鲤鱼肝细胞成脂，为构建鲤肝脂肪变性模型提供基础材料。

主权项：1.一种鲤鱼肝脏细胞系的构建及诱导成脂的方法，其特征在于鲤鱼肝脏细胞系的构建及诱导成脂的方法按照以下步骤进行：一、肝组织处理：鱼体消毒后清洗鱼体内的肝组织；二、消化肝脏组织将处理后的肝组织剪成组织块，使用0.125％～0.25％胰酶在26～30℃条件下消化18min～1h，然后添加含血清的DMEMF12完全培养基终止消化；其中所述含血清的DMEMF12完全培养基按照体积百分数由13～17％的胎牛血清、0.8～1.2％的L-谷氨酰胺、0.8～1.2％的青霉素链霉素混合液、0.8～1.2％的鲤鱼血清、0.8～1.2％的胚胎提取物和78.2～83.8％的DMEMF12基础培养基组成；胰酶消化过程中每3～5min晃动一次；三、原代培养及传代将消化后肝脏组织在1200～1500rmin条件下离心5min得到细胞及组织块沉淀，再将细胞及组织块沉淀用鲤鱼血清包裹贴于预先包被的T25培养瓶中，补入1mL含15％胎牛血清的DMEMF12完全培养基，转入26～30℃、5％CO2的培养箱进行原代培养，次日更换DMEMF12完全培养基，然后每2～3天更换12的DMEMF12完全培养基，5～7天长出单层肝细胞再传代培养，传代培养2～3天细胞融合至70～90％，0.125％胰酶消化，按20000cellscm2进行计数铺瓶，传代至P30后完成细胞系肝细胞的制备；四、肝细胞诱导成脂使用成脂诱导培养基培养肝细胞，每2天12换液，7～8天即可诱导出脂滴，成功构建肝脏脂肪模型；其中所述成脂诱导培养基包括DMEMF12完全培养基、10～20μgmL胰岛素、0.4～0.6mmolLIBMX、1μmolL地塞米松、10nmolL3,3′,5-三碘代-L-甲状腺原氨和1％脂质混合物。

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